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检测样品 管家基因H 目的基因X 定量结果平均值 定量结果平均值 校正值 相对量 Sample1(空白） 40400 356.5 0.0081 1 Sample2(空白） 42800 317 Sample3(3hr） 39900 383 0.0096 1.18 Sample4(3hr） 42900 390 0.0090 1.11 Sample5(6hr） 44700 1635 0.037 4.6 Sample6(6hr） 38450 1570 0.041 5.1 Sample7(9hr） 44700 367.5 0.0082 1.01 Sample8(9hr） 44900 416 0.0093 1.15 Sample9(12hr） 41600 459 0.011 1.36 Sample10(12h） 38450 458 0.12 1.48 由以上结果显示小鼠某基因经药物处理6小时时表达量最高 相对定量应用实例分析小鼠某目的基因药物处理不同时间点表达量变化 谢 谢 ！ 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * * * AAAGCAGTTTGCTGACATTGCCTAC GGAACGGTGTTCAGGACTCTGAA * 种属鉴定 临床细菌的鉴定。对临床细菌的培养物进行16SrDNA的实时扩增，并进行HRM分析，每个菌种的熔解曲线模式就如同该物种的分子指纹，从而可以根据HRM的不同对细菌种属进行鉴定。 DNA甲基化及程度分析 用HRM方法检测MGMT启动子区域内的甲基化，可检测低达0.1%的甲基化程度；根据已知甲基化程度的标准曲线可对未知样品的甲基化百分比进行测定。HRM是一种高灵敏度的甲基化检测方法，并且其高度的重复性和低成本将对肿瘤的研究和临床应用有很大帮助。 MGMT：甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶是肿瘤细胞产生亚硝脲药物抗药性的分子基础，启动子区过甲基化而导致MGMT基因的转录失活，影响MGMT蛋白表达 标准曲线分析 融解曲线分析 绝对定量和相对定量解析方法 Real Time PCR 解析方法 提取样品 绝对定量解析方法 引物设计 标准品制备 Real Time PCR反应 数据分析 流 程 绝对定量解析方法 通过制作标准曲线来确定样品的初始模板拷贝数或浓度。通常应用于病毒、细菌、衣原体、支原体的定量检测及转基因食品的检测。 105 104 103 101 扩增曲线图 标准曲线图 检测样品 检测样品 102 以上条件不可能同时得到满足，必须用内对照基因（管家基因）校正， 进行相对表达量分析。 理论上目的基因表达量分析条件 Sample B Sample A 目的基因扩增效率相同 RNA提取效率相同 细胞起始数相同 进行相对表达量分析必要性 实际上目的基因表达量分析 管家基因 维持细胞基本代谢活动所必须的基因, 如：GAPDH甘油醛-3-磷酸脱氢酶（ glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase ） 、Actin等。 筛选方法 根据文献提供 通过具体实验筛选 管家基因筛选 0 1 2 3 4 5 6 Sample1 Sample2 Sample3 Sample4 实验组 实验值 β-Actin GAPDH β-2-microglobulin HPRT 实验例 P P P O 管家基因筛选 HPRT：次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶 检测样品 目的基因 管家基因 RNA样品1 X H RNA样品2 RNA样品3 用实验例对相对定量计算进行说明 相对定量解析顺序 目的基因X 管家基因H 已知量 Ct 定量结果 已知量 Ct 定量结果 标准品1 1 35.66 1 37.46 - 标准品2 10 32.77 10 33.06 - 标准品3 100 29.20 100 29.69 - 标准品4 1000 25.75 1000 26.10 - 标准品5 10000 22.06 10000 22.51 - 标准品6 100000 18.62 100000 18.88 - Sample1 - 27.22 343.3 - 23.17 6391.5 Sample2 - 31.70 17.3 - 22.70 8589.7 Sample3 - 24.62 1946.1 - 22.