第二章核酸化学资料.ppt

核苷酸的解离曲线 pK1? = 0.9 第一磷酸基 pK3? = 6.2 第二磷酸基 pK2? = 3.7 含氮环 腺嘌呤核苷酸 pK1? = 0.7 第一磷酸基 pK3? = 6.1 第二磷酸基 pK2? = 3.7 含氮环 烯醇式羟基 鸟嘌呤核苷酸 pK1? = 0.8 第一磷酸基 pK3? = 6.3 第二磷酸基 pK2? = 4.3 含氮环 胞嘧啶核苷酸 pK1? = 1.0 第一磷酸基 pK3? = 6.4 第二磷酸基 烯醇式羟基 尿嘧啶核苷酸 pH 离子化程度 小牛胸线DNA的滴定曲线 pH DNA的紫外吸收光谱 天然DNA 变性DNA 核苷酸总吸收值 1 2 3 220 240 260 280 0.1 0.2 0.3 0.4 波长（nm） 光吸收 1 2 3 DNA的变性过程 加热 部分双螺旋解开 无规则线团 链内碱基配对 核酸的变性、复性和杂交 变性（加热） 探针 杂交（缓慢冷却） 复性（缓慢冷却） 变性：在物理、化学因素影响下， DNA碱基对间的氢键断裂，双螺旋解开，这是一个是跃变过程，伴有A260增加（增色效应）,DNA的功能丧失。 复性：在一定条件下，变性DNA 单链间碱基重新配对恢复双螺旋结构，伴有A260减小（减色效应）,DNA的功能恢复。 Southern印迹法 DNA分子 限制片段 限制性酶切割 琼脂糖电泳 转移至硝酸纤维素膜上 与放射性标记DNA探针杂交 放射自显影 带有DNA片段的凝胶 凝胶 滤膜 用缓冲液转移DNA 吸附有DNA片段的膜 分子杂交的原理示意图 不同来源的DNA单链间或单链DNA与RNA之间只要有碱基配对的区域，在复性时可形成局部双螺旋区，称核酸分子杂交（hybridization）制备特定的探针（probe）通过杂交技术可进行基因的检测和定位研究。实例：southern印迹法 Tm：熔解温度（melting temperature） Poly d(A-T) DNA Poly d(G-C) DNA的变性发生在一个很窄的温度范围内，通常把热变性过程中A260达到最大值一半时的温度称为该DNA的熔解温度，用Tm表示。 Tm的大小与DNA分子中（G+C）的百分含量成正相关，测定Tm值可推算核酸碱基组成及判断DNA纯度。 某些DNA的Tm值 60 80 100 1 .0 1 .4 1 .2 100% A260 t \ 0C Tm Tm Tm 1 2 3 1 2 3 人类基因组计划概况（Human Genome Project，HGP） 该计划是美国科学家在1985年率先提出，1990年正式启动。美、英、德、法、日先后参加了此项工作，1999年我国成为 HGP的第六个成员国。 HGP旨在阐明人类基因组DNA所具有的3×109核苷酸的序列，发现所有的人类基因并阐明其在染色体上的位置，破译人类的全部遗传信息，使得人类第一次在分子水平上全面地认识自我。 到目前为止，已完成了人类基因组的框架图，测序的工作已基本完成。 HGP的实施，揭开了生命科学新的一页，它可以造福于人类，但也面临的伦理的挑战。 HGP取得的成就 ? 完成了人类基因组工作草图绘制,揭示了人类基因组若干细节 ? 基本上测定了人类基因组上的碱基序列 ? 一些模式生物(果蝇、拟南介等)和作物（如水稻）基因草图绘制成功，测序基本完成 ? 促进了生物信息学、蛋白质组学、糖组学的迅猛发展 ? 人类基因组草图绘就，中国科学家功不可没 HGP面临的挑战 ? 基因的隐私权问题 ? 基因组图谱和信息的使用与人的社会权利问题 ? 基因资源问题 ? 基因知识的滥用问题 人类将进入生物经济时代 基因——操纵生命的工具 基因组——潜藏着巨大的经济价值 基因技术——21世纪的投资热点 谁掌握了人类基因图谱，就等于谁破译了人类的生命密码，获得了操纵生命的工具。 与互联网相比，网络只是对人类的信息沟通带来了巨大的革命，而基因领域的革命则能够从根本上改变人类的命运，基因工程所带来的商业机会将会大大超过网络。 离心机结构示意图 转头 转头腔 沉降样品 驱动马达 真空 冷冻 沉降系数（sedimentation coefficient） 生物大分子在单位离心力场作用下的沉降速度称为沉降系数。即沉降系数是微颗粒在离心力场的作用下，从静止状态到达极限速度所需要的时间。 数学定义式为： 沉降系数单位：由于蛋白质、核酸、病毒等的沉降系数介于1×10-13到200×10-13秒的范围，为方便起见，把作为沉降系数的一个单位，用Svedberg单位，用即S表示。 沉降系数（s）与相对分子量（Mr）的关系: