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分子发光 分子发光概述 荧光与磷光原理 荧光与磷光仪器 荧光与磷光特点和应用 化学发光 一 分子发光概述 基本原理：处于基态的分子吸收能量（电、热、化学和光能等）被激发至激发态，然后从不稳定的激发态返回至基态并发射出光子，此种现象称为发光。发光分析包括荧光、磷光、化学发光、生物发光等 荧光和磷光：物质吸收光能后所产生的光辐射 二 荧光与磷光原理 （一） 荧光及磷光的产生 1 分子能级与跃迁 分子能级=电子能级(Ee)+振动能级(Ev)+转动能级(Er) 基态(S0)→激发态(S1、S2)：吸收特定频率的辐射；量子化；跃迁一次到位 激发态→基态：多种途径和方式；速度最快、激发态寿命最短的途径占优势 2.电子激发态的多重度 3.激发态→基态的能量传递途径 (1)非辐射能量传递过程 （2）辐射能量传递过程 （二）激发光谱与荧光光谱 1 激发光谱 改变激发波长，测量在最强荧（磷）光发射波长处的强度变化，以激发波长对荧光强度作图可得到激发光谱 激发光谱形状与吸收光谱形状完全相似，经校正后二者完全相同！这是因为分子吸收光能的过程就是分子的激发过程。激发光谱可用于鉴别荧光物质；在定量时，用于选择最适宜的激发波长 2.荧光光谱(或磷光光谱) 3.激发光谱与发射光谱的关系 (三)荧光的产生与分子结构的关系 2.化合物的结构与荧光 （4）取代基效应 ??给电子取代基增强荧光（p-π共轭），如-OH-、OR、-NH2、-CN、NR2等 ??吸电子基降低荧光，如-COOH、-C=O、-NO2、-NO、-X等 ??重原子效应：重原子的高核电荷引起或增强了溶质分子的自旋-轨道耦合作用（能级之间的交叉现象比较严重，因此容易发生自旋轨道的相互作用），从而增大了S0→T1吸收跃迁和S1→T1体系间窜跃的几率，即增加了T1态粒子的布居数，有利于磷光的产生和增大磷光的量子产率 3 影响荧光强度外因 （1）溶剂效应：溶剂极性可增加或降低荧光强度（改变π—π*及n—π*跃迁的能量）；与溶剂发生氢键，化合或使之解离作用从而改变荧光物质结构来增加或降低荧光强度 （2）温度：温度增加，荧光强度下降（因为内、外转换增加、粘度或“刚性”降低），因此体系降低温度可增加荧光分析灵敏度 （3）pH值：具酸或碱性基团的有机物质，在不同pH值时，其结构可能发生变化，因而荧光强度将发生改变；对无机荧光物质，因pH值会影响其稳定性，因而也可使其荧光强度发生改变 （4）各种散射光：当激发光波长与荧光波长很靠近时，溶剂产生的散射光有可能与荧光光谱重叠产生干扰；改变激发波长后，散射光随激发波长的改变而改变，荧光波长与激发波长无关 （5）内滤光和自吸：体系内存在可以吸收荧光物质的激发光和发射光的物质，或荧光物质的荧光短波长与激发光长波长有重叠，均可使荧光强度下降，称为内滤光；当荧光物质浓度较大时，可吸收自身的荧光发射，称为荧光自吸 （6）荧光猝灭 碰撞猝灭：被激发荧光分子与猝灭剂发射碰撞使荧光分子以无辐射形式返回基态使荧光猝灭 静态猝灭：荧光分子与猝灭剂形成不发荧光的配合物 转入三重态的猝灭：荧光物质中引入卤素重原子或由于溶解氧存在使荧光物质氧化或由于氧分子的顺磁性促进体系间的跨越，使激发态的荧光分子转成三重态 自猝灭：当荧光物质浓度较大时，产生激发态的荧光分子与基态的荧光分子碰撞使荧光猝灭 （四）定量分析 根据荧光产生的机理，溶液的荧光强度和该溶液的吸收光强度以及荧光效率成正比 （五）定性分析 任何荧（磷）光都具有两种特征光谱(物质结构）：激发光谱与发射光谱，它们是荧（磷）光定性分析的基础 方法：比较法 三 荧光和磷光仪器 （一）荧光仪器结构流程 测量荧光的仪器主要由四个部分组成：激发光源、样品池、双单色器系统、检测器 特殊点：有两个单色器，光源与检测器通常成直角 （二）磷光仪器 2 低温磷光（液氮） 由于磷光寿命长，T1的非辐射跃迁（内转换）几率增加，碰撞失活（振动弛豫）的几率、光化学反应几率都增加，从而降低磷光强度，因此有必要在低温下测量磷光 溶剂要求：易提纯且在分析波长区无强吸收和发射（背景低）；低温下形成具足够粘度的透明的刚性玻璃体 常用的溶剂：EPA——乙醇+异戊烷+二乙醚（2:2:5）；IEPA——CH3I+EPA（1:10） 3. 室温磷光 低温荧光需低温实验装置且受到溶剂选择的限制 1）固体基质：在室温下以固体基质（如纤维素等）吸附磷光体，增加分子刚性、减少三重态猝灭等非辐射跃迁，从而提高磷光量子效率 2）胶束增稳：利用表面活性剂在临界浓度形成具多相性的胶束，改变磷光体的微环境、增加定向约束力，从而减小内转换和碰撞等去活化的几率，提高三重态的稳定性。利用