动物病毒分子生物学解读.ppt

第十三章动物病毒分子生物学 第二节 动物ssDNA病毒 第三节动物dsRNA病毒 第二节动物ssDNA病毒 一、 细小病毒基因组及其编码产物 细小病毒粒子： 为20面体对称，直径18-26nm，无包膜，病毒粒子外壳由3种外壳蛋白（VP1 、 VP2 、 VP3）共60个亚基组成，病毒粒子内含有单分子的单链DNA。 一、 细小病毒基因组及其编码产物 细小病毒亚科主要感染温血动物，其宿主范围包括禽类、人和哺乳动物。但依赖性细小病毒属的腺联病毒（AAV）增值需要辅助病毒的共感染，这些辅助病毒既可以是腺病毒，也可以是疱疹病毒，或者是巨细胞病毒、假狂犬病毒。 疱疹病毒 腺病毒 一、 细小病毒基因组及其编码产物 所有细小病毒基因组的5′端和3 ′端，均形成反转回序列，呈T型或Y型的发夹结构，这是细小病毒DNA复制所需的引物。 一、 细小病毒基因组及其编码产物 一、 细小病毒基因组及其编码产物 （二）依赖性细小病毒基因组 一、 细小病毒基因组及其编码产物 （二）依赖性细小病毒 AAV的复制和转录调节较为复杂，是因为AAV的复制需要辅助病毒的共感染，在腺病毒共感染的情况下，腺病毒早期基因区编码的蛋白可激活AAV的DNA复制、mRNA转录和蛋白质翻译，而反过来AAV也可正调节或副调节自身基因和辅助病毒基因表达。 AAV的rep基因产物能够正/负调节P5、 P19 、P40启动子，在有腺病毒共感染的情况下，rep基因产物 行使正调节功能，它是大量合成AAV mRNA所必需的。在缺少辅助病毒共感染的情况下，rep基因产物产生负调节功能。 AAV在缺少辅助病毒时，其基因组很容易整合到宿主细胞的染色体DNA上（成为原病毒AAV），形成AAV的潜伏感染。 二、细小病毒的复制与转录 （一）自主细小病毒： 在宿主DNA聚合酶的作用下，其病毒DNA以连置换模式进行复制，它通过自身DNA末端回文序列所形成的反转回折3端作为引物，起始DNA合成。 细小病毒的复制和转录发生在感染细胞核内，因其基因组DNA复制完全依赖于细胞DNA聚合酶和蛋白因子，通常自主细小病毒只有宿主细胞进入S期时，才能进行复制，而在静止细胞中，不能进行自我复制，另外AAV的复制还需要辅助病毒的存在。 二、细小病毒的复制与转录 双链复制型DNA 二、细小病毒的复制与转录 . 二、细小病毒的复制与转录 第二节动物ssDNA病毒 AAV作为基因克隆的载体： 由于AAV能够整合到宿主细胞的染色体上，整合率19%-70%，因此AAV可作为基因表达的载体，但其包被外源DNA的大小十分有限，大约为4-4.5kb. AAV与抑癌作用 AVV的辅助病毒如腺病毒/疱疹病毒都是具有一定致癌能力的肿瘤病毒，当AAV与具有致癌作用的腺病毒共感染时，可以降低腺病毒诱发形成肿瘤的能力，或者使其形成肿瘤的时间延长。 第三节 动物dsRNA病毒 一、 呼肠孤病毒粒子结构 动物呼肠孤病毒粒子呈球形，无包膜，有双层衣壳，外观为二十面体对称，其直径为73-85nm.（不包括长纤维σ1） 一、 呼肠孤病毒粒子结构 整个病毒粒子由8个蛋白构成， μ1（一般切割成μ1 N， μ1 C）， μ2， σ1， σ2， σ3， λ1， λ2， λ3。其中λ2，μ1, σ1和σ3蛋白组成外衣壳，另外4种蛋白λ1， λ3， μ2和σ2组成内衣壳。 体外通过蛋白酶降解完整的病毒粒子，可以生成两种病毒颗粒，即中间体病毒颗粒（ISVP）和核心 σ3 μ1 μ1 σ1 λ1 σ2 λ3， μ2 λ2 二 、呼肠孤病毒的基因组 人和哺乳动物的呼肠孤病毒基因组dsRNA具有10个基因节段，分为3组，共编码11种蛋白质（8种外壳蛋白和3种非结构蛋白）。 大基因节段 中基因节段 小基因节段 每个基因节段的5′端和3 ′端均有一段小的非翻译区，其作用有mRNA包装，RNA聚合酶识别，作为起始信号序列，决定病毒翻译效率。 三、 呼肠孤病毒编码的蛋白质及其功能 三 、呼肠孤病毒编码的蛋白质及其功能 四 、呼肠孤病毒的转录与复制