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不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白.ppt
不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白 一、实验目的 1．掌握凝胶电泳的三个效应。 2．了解该电泳的特点及适用范围。 二、基本原理 讲解聚丙烯酰胺凝胶电泳的三种效应： 1、浓缩效应。 2、电荷效应。 3、分子筛效应。 三、实验原理 本实验利用聚丙烯酰胺凝胶作电泳支持物。电荷数和分子大小不一的各种血清蛋白质通过浓缩效应、电荷效应、分子筛效应而被精细地分离。由于具有以上三种效应，所以此方法分离效果好，分辨率高，血清蛋白在纸上电泳仅能分成5～7个组分，而在聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳中可分出12～30个组分。 四、实验材料 1．圆盘电泳槽。 2．电泳仪。 3．玻璃管（10×0.6 cm）。 4．50μl微量注射器、5ml注射器。 5．10 cm长的局麻针头，10号针头。 6．试剂 五、实验方法 （一）凝胶柱的制备 1．凝胶玻璃管的准备 2．分离胶的制备 3．浓缩胶的制备 4. 装柱 (二)加样 (三)电泳 (四)剥胶 (五)固定和染色 (六)漂洗 六、注意事项 1．丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺是神经毒性试剂，并对皮肤有刺激作用，注意避免直接接触。大量操作时应在通风橱中进行。 2．丙稀酰胺和甲叉双丙烯酰胺溶液应装在棕色瓶中，置冰箱内（4℃）保存。可贮存1～2个月。测定pH（4.9～5.2）可检查其是否失效，失效不能聚合。 3．TEMED要密封保存，过硫酸铵溶液最好当天配制，以防止氧化失效。 4．凝胶的聚合速度与温度关系很大，温度低时，聚合速度减慢，必须根据实验时的温度调整3号、4号试剂的用量，以使凝胶在30 min内聚合。 实验思考 1、解释聚丙烯酰胺凝胶电泳的三个效应。 2、由本次实验结果解释醋纤薄膜电泳分离后各条区带清晰度的差别。 * * *
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