第六章微生物菌种的选育考试汇总技术报告.docVIP

第六章 微生物菌种的选育 第一节 从自然界中分离筛选菌种 *1.基本步骤：采样→增殖培养→纯种分离→筛选(初筛、复筛) 2.环境条件对土壤样本中微生物分布的影响：（1） 营养环 境（2）水分（3）温度：采样以秋季为好（4）通风（5）酸碱度：细菌、放线菌：中性或偏碱；霉菌、酵母：偏酸 3. .采样方法 （1） 去除表层土 （2） 取5-15cm土样几十克，装入无菌牛皮低袋或塑料袋中 4.增殖培养（富集培养） 目的：提高样品中目的菌的数量和比例 原理：通过控制营养成分和/或培养条件，使样品中目的 菌得以大量繁殖而非目的菌的生长受到抑制或繁殖减缓，从而提高样品中目的菌 的数量和比例 *方法：（1）控制营养成分 （2） 控制培养基pH （3）控制培养温度：30℃左右培养，可培殖嗜温微生物50~60℃培养，可培殖嗜热微生物，筛选耐热菌株 （4）热处理——增殖芽孢细菌 样品悬浮液经80℃、10分钟处理，杀死营养体，再添加营养培养后可增殖产芽孢细菌（5）添加抑制剂 纯种分离 （一）纯种分离的方法 目的：将目的菌从混杂的微生物中分离出来，获得纯培养 方法：涂布平板分离法、倾注平板分离法、平板划线分离法、组织分离法 **（二）平皿反应快速检出法 依据是检测单菌落是否产目的产物并对目的产物的产量进行粗略估计 A纸片培养显色法：以饱浸含有某种指示剂的固体培养基的滤纸搁置在培养皿中，用牛津杯架空，下放一小团浸有3%甘油的脱脂棉保湿，用接种环将适量细胞悬液接于滤纸上，保温培养，得到分散的单菌落，菌落周围形成对应的颜色变化。指示剂变色圈与菌落直径之比值大者表示产物的产量高，由此可以挑选产量较高的菌株。所用的指示剂是酸碱指示剂或能与产物反应产生有色物质的其他指示剂。 B透明圈法：利用混浊的底物被分解后形成透明圈的大小，可以检出微生物分解利用此物质的能力。可溶性淀粉——淀粉酶，粉末碳酸钙——有机酸，酪素——蛋白酶 C变色圈法：直接用显色剂或指示剂掺入培养基中，或喷洒至已形成菌落的培养基的表面，根据显色圈或变色圈等形成而对目的菌进行检出，稀碘液与淀粉 变色圈的颜色及大小 E生长圈法：生长圈法是根据工具菌在目的菌周围形成生长圈而对目的菌进行检出。工具菌一般为某种生长因子的营养缺陷型，而对目的菌在缺乏该生长因子的琼脂培养基上生长并分泌生长因子或生长后分泌的某种酶能够使前体转化为该生长因子。经过培养后，工具菌会在目的菌周围形成生长圈。生长圈法用于检出氨基酸、核苷酸以及维生素等生产菌。 F抑菌圈法：是根据工具菌在目的菌的周围的生长被抑制而形成一个抑菌圈而对目的菌进行检出。目的菌在生长过程中能分泌抗生物质或能分泌某种酶能将无抑菌作用的前体物质转化成抗生物质，而工具菌则是对该抗生物质敏感的菌株。此法可以直接在分离培养基中对目的菌进行检出。但是由于微生物 要到生长晚期才能分泌抗生物质，需要培养的时间长，各菌产生的抗菌物质相互干扰，所以往往需要分两步进行————先用不加工具菌的琼脂培养基对样品进行纯种分离，待菌落形成后，将菌落与周围小块琼脂培养基用直径6mm的木塞穿孔器一起取出，置于另一无菌培养基中保湿培养4-5天，使微生物所产生的抗生物质在小琼脂块中积累；然后，将上述琼脂块转移到涂有工具菌的鉴定板上，保持琼脂块之间的距离为2cm左右，培养过夜后即可观察到抑菌圈，抑菌圈的大小反映了琼脂块中抗生物质浓度的高低。抑菌圈法用于抗生素产生菌的检出。 厌氧微生物的分离方法 厌氧微生物要求在低氧化还原电位的培养基中才能生长。保持低氧化还原电位方法：一是在培养基中加入还原物质（如半胱氨酸等）二是要为微生物创造一个无氧环境 .厌氧分离（培养）技术：高层琼脂柱技术、厌氧罐技术、厌氧手套箱技术 7.筛选 初筛：通风发酵菌种，通过摇瓶发酵进行，每株一瓶 目的：淘汰80%-90%的分离菌株中的低产菌 复筛：每株3~5瓶，可提前培养种子，使接种量比较一致，3~5%接种量， 复筛可进行多次，逐步淘汰，留下3~5株甚至最好的1株 第二节 基因突变 突变型的类型： 形态突变型：指细胞个体形态或菌落形态发生改变的突变型 营养突变型：野生型菌株由于基因突变而丧失合成一种或几种生长因子的能力，这种突变株叫做营养缺陷型突变株。主要有氨基酸缺陷型、维生素缺陷型和嘌呤嘧啶缺陷型 抗性缺陷型：由于基因突变而产生对某种化学药物、致死物理因子或噬菌体具有抗性的变异菌株叫抗性菌株。 致死突变型：由于基因突变而导致个体死亡的突变型 条件致死突变型：在某种条件下可以正常生长繁殖并呈现其固有表型，而在另一条件下致死的突变