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生化试验 糖醇类代谢试验： （一) 糖醇类发酵试验 （二）葡萄糖氧化发酵（O/F)试验 （三）V-P试验 （四）甲基红（M.R.)试验 （五）七叶苷水解试验 （六）甘油品红试验 氨基酸和蛋白质代谢试验： （一）靛基质（吲哚）试验 （二）H2S试验 （三) 尿素酶试验 （四）氨基酸脱羧酶试验 （五）苯丙氨酸脱氨酶试验 （六）明胶液化试验 有机酸盐和铵盐的利用试验： （一）枸橼酸盐（柠檬酸盐）利用试验 （二）丙二酸盐利用试验 呼吸酶类试验： （一）氧化酶试验 （二）过氧化氢酶类试验 （三）硝酸盐还原试验 （四）氰化钾试验 毒性酶类试验： （一）溶血试验 （二）链激酶试验 （三）卵磷脂酶试验 （四）血浆凝固酶试验 六、三糖铁（TSI）试验 概述 什么是生化试验？ 指通过利用生物化学的方法来测定微生物的代谢产物、代谢方式和条件等来鉴别细菌的类别、属种的试验。 检验细菌的生化试验范围 1、糖醇类代谢试验 2、氨基酸和蛋白质代谢试验 3、有机酸盐和铵盐的利用试验 4、呼吸酶类试验 5、毒性酶类试验 6、三糖铁（TSI)试验 生化试验的方法 1、培养物应加入某种底物与指示剂，经接种、培养后，观察培养基的PH值变化。 2、培养物中应加入试剂，观察它们同细菌代谢产物所生成的颜色反应。 3、根据酶作用的反应特性，测定酶的存在。 4、根据细菌对理化条件和药品的敏感性，观察细菌的生长情况。 生化试验的注意事项 1、待检菌应是新鲜培养物，培养18---24小时。 2、待检菌应是纯种培养物。 3、遵守观察反应的时间，观察结果的时间，多为24小时或48小时。 4、应作必要的对照试验。 5、提高阳性检出率，至少挑取2---3个待检的疑似菌落分别进行试验。 糖醇类代谢试验 （一) 糖醇类发酵试验 1、原理： 不同的细菌对各种糖醇的分解能力及所产生的代谢产物各不同。 有的能分解多种糖醇，有的能分解1---2种糖醇，有的分解糖醇能产酸产气，有的 分解糖醇只产酸不产气，根据这些特点，可鉴别细菌。 2、试验方法： 用接种针或环移取纯培养物少许，接种于糖发酵管中，若为半固体培养基，则用接种针穿刺接种。置36±1℃培养1---3天，每天观察结果。 3、结果观察与记录： ①产酸不产气，阳性，以“+”表示； ②产酸产气，阳性，以“”表示； ③不产酸不产气，阴性，以“-”表示。 葡萄糖氧化发酵（O/F)试验 1、原理： ①细菌对葡萄糖的分解，分为氧化型和发酵型。 ?氧化性细菌在有氧条件下才能分解葡萄糖，无氧条件不能分解葡萄糖； ?发酵型细菌在有氧无氧条件下均可分解葡萄糖。 ②不分解葡萄糖的细菌称为产碱型。 ③根据糖管的色泽变化可鉴别细菌。 2、试验方法： 取待检菌，以穿刺接种于两管葡萄糖半固体培养基上，在其中一管加入一层（约 1cm）灭菌的液体石蜡以隔绝空气，在37℃培养2---4天，每天观察结果。 3、结果观察与记录： 略 V-P试验 1、原理： 某些细菌能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸经缩合、脱羧生成乙酰甲基甲醇；后者在强碱环境下，被空气中的氧氧化为双乙酰，在α-萘酚和肌酸的催化作用下，双乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称为V-P（+）反应。 2、试验方法： ①奥梅拉法 ②贝立脱法 ③快速法 3、结果观察与记录： ①发酵管出现红色者，为阳性，记V-P+ ②发酵管顶部出现黄色或铜绿色者，为阴性， 记V-P- 甲基红（M.R.)试验 1、原理： 细菌分解葡萄糖产生丙酮酸后，由于代谢的途径不同，有的细菌可使丙酮酸转化生成乳酸、琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，使培养基PH值下降至PH4.5以下，使甲基红试剂变红，为甲基红试验阳性；有的细菌使丙酮酸脱羧后形成酮、醇类中性产物，培养液PH5.4，甲基红指示剂呈橘黄色，为甲基红试验阴性。 2、试验方法： 挑取新