基因工程基本步骤1.ppt

基因工程的基本操作程序 基因工程的基本操作程序 A U U C C U A U A G G A G A U U G U U A U A A U C C A C C A C C A C C U A U A G G A G A U U G U U A U A A U C C A A C A A C A A C A A U A G G A G A U U G U U A U A A U C C A A C A A U A A U A A U A A U A G G A G A U U G U U A U A A U A C A A U A U U A U U A U U A A U A G G A G A U U G U U A U A A U A U A U U A A U A G G A G A U U G U U A U A A U U U A A U A G G A G A U U G U U A U A A U 多肽 规律:决定蛋白质中的一个氨基酸,需mRNA中____至少个碱基;需DNA中___至少个碱基. DNA(双链): mRNA(单链): 蛋白质: 碱基 氨基酸 1个 3个 6个 遗传信息 遗传密码 AA序列 碱基 外显子 内含子 与RNA聚合酶结合位点 编码区 非编码区 非编码区 非编码区 非编码区 与RNA聚合酶结合位点 编码区 原核生物基因 真核生物基因 基因的结构 启动子 起始密码 /终止子 /终止密码 存在分子： 作用： DNA(基因) 启动/终止转录 mRNA 起始/终止翻译 1、人工合成 2、从基因文库中获取 (基因比较小， 序列已知) 基因文库 基因组文库 部分基因文库－－如：cDNA文库 目的基因的获取 DNA合成仪 2、从基因文库中获取目的基因 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 基因文库 基因组文库 部分基因文库 (CDNA文库) 某生物体内全部DNA 许多DNA片段 受体菌群体 2、从基因文库中获取目的基因 限制酶 与运载体连接 导入 基因组文库 某种生物某个时期的mRNA cDNA 反转录 受体菌群体 与运载体连接 导入 部分基因文库 （cDNA文库） 　为什么cDNA文库中不含启动子、内含子？ 从基因文库获取目的基因 根据目的基因的有关信息，如： 　　基因的已知核苷酸序列； 　　基因的功能； 　　基因在染色体上的位置； 　　基因的转录产物mRNA； 　　基因的表达产物蛋白质； 　　 …… 1、人工合成 2、从基因文库中获取 3、利用PCR技术扩增 (基因比较小， 序列已知) 基因文库 基因组文库 部分基因文库－－如：cDNA文库 聚合酶链式反应 目的基因的获取 DNA合成仪 3、利用PCR技术扩增目的基因 聚合酶链式反应，在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。可以获得大量的目的基因。 循环 变性 退火 延伸 细胞内复制 PCR扩增 DNA母链 4种　脱氧核苷酸 DNA聚合酶 引物 温度控制 1）模板： 2）原料： 3）酶： DNA母链 4种　脱氧核苷酸 解旋酶 DNA聚合酶 等 DNA增殖 4）特点: 半保留复制 边解旋边复制 (不用DNA解旋酶) 半保留复制 全解旋再复制 复制原点+启动子+目的基因+终止子+标志基因 基因表达载体的组成 基因表达载体的构建---核心 基因表达载体的构建过程 质粒 DNA分子 限制酶处理 两个切口 获得目的基因 DNA连接酶 重组DNA分子（重组质粒） 同一种 一个切口 两个黏性末端 (一)常用的受体细胞： 有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。 （二）将目的基因导入受体细胞的原理 借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。 将目的基因导入受体细胞---转化 （三）导入方法 1.将目的基因导入植物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 农杆菌转化法 适用于 双子叶植物 裸子植物 将目的基因导入受体细胞---转化 适用于 单子叶植物 基因枪法 胚珠 花药 花丝 柱头 花柱 子房壁 子房 雄蕊 雌蕊 花粉管通道法 适用于 被子植物 * 一、目的基因的获取 二、基因表达载体的构建 三、将目的基因导入受体细胞 四、目的基因的检测与鉴定 基因:有遗传效应的DNA片段 基因的分布,成分,结构,功能与DNA一致 染色体 基因 思考：什么是基因? 基因与ＤＮＡ的关系 　　 基因与染色体的关系 　　　 回忆旧知识： 基因的基本功能是什么？ 1、通过复制，在后代的传种接代中传递遗传信息 2、在后代的个体发育过程中，