第四章植物器官和组织培养资料.pptVIP

2、茎尖培养脱毒的基本原理： 病毒在植物体内的分布具有不均匀性 1934年，White通过观察烟草根系，首先发现病毒在植物的不同区域分布是不均匀的，越靠近根尖区病毒越少，根冠区不含病毒。 1949年，Limasset和Cornnet提出了茎的分生组织区也应存在与根尖分生组织区同样的病毒分布特征。 1952年，Morel 和Martin首先利用马铃薯茎尖分生组织进行离体培养获得了无病毒苗，证实了这种理论。同时也获得了大丽花的无病毒苗。并建立了茎尖组织培养的繁殖体系。 外植体选取—热处理钝化病毒—分生组织培养 | 形成茎、根 | 再生完整植株 | 病毒检测 | 扩繁 — 进一步检测病毒 — 移栽—获得脱毒植株 3、茎尖培养脱毒基本技术规程： （1）母体植株的选择和预处理 母体的选择 欲脱毒材料的品种典型性 植株健康程度 外植体的预处理 （2）茎尖分生组织培养再生植株 基本过程：外植体消毒—茎尖剥离—茎砂培养 茎尖分生组织培养有两个概念： Shoot tip/shoot apex Apical meristem/apical dome virus-free tissue virus particles found here （3）脱毒效果检测 直接测定法 指示植物鉴定：指利用具有能够辨别某种病毒专化性症状的寄主植物进行鉴定。 血清鉴定：试管沉淀反应；免疫双扩散；酶联免疫吸附测定。 核酸分析法 指示植物 CMV病毒感染的植株叶片 （4）脱毒苗的保存与繁殖 脱毒苗的离体保存与繁殖 建立脱毒种苗生产繁网络体系 木本植物建立隔离的脱毒苗母本圃 4、影响脱毒效果的因素： 母体材料病毒侵染的程度 外植体的生理状态 起始培养的茎尖大小 茎尖大小对马铃薯脱毒效果的影响 茎尖长（mm） 叶原基数 小植株数 脱毒植株数 脱毒率（%） 0.12 1 50 24 48 0.27 2 42 18 42.9 0.6 4 64 0 0 思考题： 植物器官和组织培养的基本程序是什么？如何获得无菌培养材料？ 离体茎尖经培养后将会出现怎样的培养反应？ 植物脱病毒的机理是什么？ 影响茎尖组织培养脱毒效果的因素有哪些？ 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * 第四章 植物器官和组织培养 2006年10月 植物器官培养（Organ Culture）是指对植物某一器官的全部或部分或器官原基进行离体培养的技术。分为营养器官（根、茎、叶）和繁殖器官（果实、种子、花器官）培养。 组织培养指对植物组织（分生组织、表皮组织、薄壁组织）及愈伤组织进行离体培养的技术。 植物器官和组织培养的基本程序 植物营养器官培养 植物繁殖器官培养 植物组织培养及脱毒苗的生产 第一节 植物器官和组织培养的基本程序 基本程序： 一、无菌外植体的获得 二、初代培养物的建立 三、形态发生和植株再生 四、培养产物的观察记载 一、无菌外植体的获得 1、茎尖、茎段、叶片的灭菌 2、根、块茎、鳞茎的灭菌 3、花蕾的灭菌 4、果实、种子的灭菌 清洗外植体 利用灭菌剂对外植体灭菌 无菌水冲洗3-5次 主要过程： 二、初代培养物的建立 （一）无菌环境 （二）规范操作 （三）条件合适 三、形态发生和植株再生 具根茎的两极器官 单极器官 先茎后根 先根后茎 器官化途径 体胚途径 愈伤组织 外植体 植株 植株 植株 植株 四、培养产物的观察记载 （一）愈伤组织 诱导率=产生愈伤的外植体 数/外植体总数 （二）胚状体 诱导率的计算 （三）芽 芽分化率的计算 （三）根 发根率=发根芽数/培养芽数 第二节 植物营养器官培养 根段培养 茎段培养 叶培养 植物叶培养是指以离体的叶片器官为外植体进行培养，再生植株的过程。植物叶培养常用于研究叶形态发生过程以及进行光合作用、叶绿素形成、遗传转化等。 培养过程主要包括：愈伤组织诱导；不定芽分化；无菌苗增殖及生根等。 一、植物叶培养 叶片离体培养过程 A B E C 花烛叶片离体培养及植株再生 （一）愈伤组织诱导： 诱导接种的叶片外植体脱分化形成愈伤组织的过程。愈伤组织的形成通常经历诱导期、分裂期和分化期等阶段。 高浓度生长