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生物信息学引论实验课报告（3） 学号 1112800113 姓名 何玲 实验时间 10-23 成绩 实验题目 基因序列结构分析 指导教师 实验目的与要求 1、熟悉使用BioEdit软件熟悉使用BioEdit软件进行核酸序列的点突变定位；BioEdit软件1.??????? 人瘦素 (leptin) 基因编码区点突变408 A→C的定位：打开BioEdit软件→将人瘦素 (leptin) mRNA的FASTA格式序列输入分析框→点击左侧序列说明框中的序列说明→点击Sequence栏→选择Nucleic Acid→点击Find next ORF→从起始密码ATG的第一个碱基开始查找该基因编码区408（464，NM_000230）位碱基（A）； 2.??????? 瘦素 (leptin) 基因编码区点突变408 A→C的限制酶切点分析：再点击Sequence栏→选择Nucleic Acid→点击Restriction Map→点击Generate Map按钮→找到该基因编码区408（464，NM_000230）位碱基后可见该位置有限制酶Hind III的切点（AAGCTT）；（提示：如发生408 A→C突变，则该酶切点消失）； 3.??????? 瘦素 (leptin) 基因编码区点突变408 A→C分析的引物设计：调用Internet浏览器并在其地址栏输入primer3网址（/cgi-bin/primer/primer3.cgi）→用复制/粘贴方式将人瘦素 (leptin) mRNA（NM_000230）的FASTA格式序列输入分析框→在targets框填入464，1→选择Product Size (~300 bp)和Primer Tm (~58.0) →点击Pick Primesr按钮→从显示的五队引物中选择合适的引物； 4.瘦素 (leptin) mRNA定量的引物设计：方法同“3. 人瘦素 (leptin) 基因编码区点突变408 A→C分析的引物设计”，但在targets框将突变点位置改为外显子交会点位置，另外Product Size 一般选择~150 bp。 ?1、解答步骤： 将人瘦素 (leptin) mRNA的FASTA格式序列输入分析框 →点击左侧序列说明框中的序列说明 →点击Sequence栏→选择Nucleic Acid→点击Find next ORF→从起始密码ATG的第一个碱基开始查找该基因编码区408（464，NM_000230）位碱基（A）； 2.??????? 瘦素 (leptin) 基因编码区点突变408 A→C的限制酶切点分析：再点击Sequence栏→选择Nucleic Acid→点击Restriction Map→点击Generate Map按钮→找到该基因编码区408（464，NM_000230）位碱基后可见该位置有限制酶Hind III的切点（AAGCTT）；（提示：如发生408 A→C突变，则该酶切点消失）； 发生408 A→C突变，该酶切点消失??????? 人瘦素 (leptin) 基因编码区点突变408 A→C分析的引物设计：调用Internet浏览器并在其地址栏输入primer3网址（/cgi-bin/primer/primer3.cgi）→用复制/粘贴方式将人瘦素 (leptin) mRNA（NM_000230）的FASTA格式序列输入分析框→在targets框填入464，1→选择Product Size (~300 bp)和Primer Tm (~58.0) →点击Pick Primesr按钮→从显示的五队引物中选择合适的引物； 输入瘦素序列 填好数据所得的五个引物 下拉菜单寻找目引物 最终选择的引物 教师评语