汞胁迫对桐花树幼苗根和叶蛋白质功能的影响教程分析.doc

汞胁迫对桐花树幼苗根和叶蛋白质功能的影响 设计方案目录： 研究现状 2. 研究目标 3. 研究方案 3.1 基本生理指标的测定3.1.1丙二醛的测定 3.1.2 还原糖的测定 3.1.3 叶绿素的测定 3.1.4 谷胱甘肽GSH）的测定 3.1.5 过氧化物酶POD）的测定 3.1.6 超氧化物歧化酶SOD）的测定 3.1.7 过氧化氢酶CAT）的测定 3.1.8 总汞的测定 3.2.2可溶性蛋白含量测定 3.2.4 非蛋白巯基（non-protein thiol，NPT）含量的测定 3.2.5 细胞可溶部分Hg的分子分布 经费预算 参考文献 1. 研究现状 红树林分布于, 红树植物是该生态系统各级消费者物质和能量的主要来源(林鹏等，1995；林鹏1997)。红树植物是热带、亚热带海湾河口优势植物种, 是该生态系统的重要初级生产者, 对维护海湾河口地区的生态平衡起着十分重要的作用。近年来，随着江河流域工农业的发展，沿海城市人口与经济的增长，大量排放的污染物汇集于河口、海湾区，从而使重金属污染日趋严重。汞是一种极毒的重金属元素, 其毒性位于各金属之首。汞分为无机汞和有机汞两大类, 后者的毒性比前者更大。当植物体中汞的积累浓度达到一定范围后, 它就会破坏细胞的结构（解凯彬李大辉施国新郝怀庆张义贤 研究目标 红树林作为一种海岸潮间带森林生态系统, 对海湾河口区域的污染具有较高承载力和耐受性。目前，在红树植物对重金属污染响应方面的研究主要集中于红树植物对重金属的富集以及生长、形态和生理学方面, 对红树植物抗污染胁迫的分子机理方面的研究还极少有报道。分子生物学和生态学原理的结合, 为污染生态学的研究开辟了一个广阔的研究领域。 本实验以红树植物桐花为材料，观察其在不同Hg浓度胁迫下的生理生态变化，以及叶、根细胞中蛋白质的适应性变化，为解释红树植物的耐Hg机制提供一些理论和实践依据。在蛋白质水平探讨红树植物对重金属具较高耐受性的分子生态机理, 可能发现在红树植物中普遍存在的高效的重金属结合物质及其控制基因, 可为汞污染的植物生理学监测提供理论基础，也可为研究红树植物抗重金属污染机制及红树林生态环境的保护提供科学依据和实践依据。 挑选株高约~30 cm，4~5对叶片，且生活力强，无病虫害大小相近的幼苗进行水培加1/4 Hogland营养液于实验室自然光下复壮（室温约2 ℃），准备验。 3.1 基本生理指标的测定3.1.1丙二醛的测定 采用硫代巴比妥酸法测定秋茄叶片和根的MDA含量。参照赵世杰等方法选取新鲜成熟叶，去除中脉剪碎混匀称取0.5 g样品，加入3 m 10％TCA和少量石英砂，研磨至匀浆移至15 m离心管；再加入2 m10％TCA将研钵中的残渣洗入离心管。匀浆在4000 r/min离心10 min。 测定：取上清液2 m（对照组2 m H2O）于新的15 m离心管中，加入2 m 0.6%TBA（用10%三氯乙酸配制）混匀离心管盖子拧紧。混合物于沸水浴中沸煮15 min，迅速冷却后在4000 rpm，4，离心20 min。取上清液测定OD532、OD450。 计算：提取液中MDA的含量 C(umol/L)=6.45OD532-0.56OD450 然后计算每克样品中MDA含量 3.1.2 还原糖的测定 采用蒽酮比色法李合生测定秋茄叶片的可溶性糖含量。称取干样0.0500～0.1000 g(0.0500~0.0700 g），分别加入15 m刻度离心管中；加蒸馏水10 m，置沸水浴中提取30 min，冷却离心，上清液倒入50 m PE瓶中，再往离心管中加10 m蒸馏水，置沸水浴第二次浸提，上清液倒入PE瓶中，向瓶中加入蒸馏水至50 m左右，称重。 吸取测定液0.5 m于大试管中，加蒸馏水摇匀，加入0.5 m蒽酮乙酸乙酯，放入波长630 nm的分光光度计中比色。 结果计算：可溶性糖％＝测定液糖含量(μg)×10-6/干样重(g)×分取倍数×100％ 3.1.3 叶绿素的测定 参照张宪政的乙醇-丙酮混合液法略有改进。选取新鲜成熟叶片，去除中脉剪碎混匀称取0.1～0.2 g叶片。等体积乙醇、丙酮混合液10 m浸泡（乙醇丙酮水=4.54.5：1），并用保鲜膜封口防止提取液挥发，置于阴暗处并定期震荡。浸泡至组织变白后，使用紫外分光光度计分别于波长663 nm、645 nm处测定其抽提液的OD值。根据以下公式计算叶绿素含量： Ca=12.7×OD663－2.69×OD645 (2.1) Cb=22.9×OD645－4.86×OD663 (2.2) Ca+b=8.02×OD663+20.20×OD645 (2.3) 叶绿体色素的含量= （mg/g） （C为叶绿素浓度，以μg/m表示） 3.1.4 谷胱甘肽G