无菌验证终稿课件解读.ppt

要根据灭菌方式及工艺条件选择适当的生物指示剂。事先要了解生物指示剂对相关灭菌工艺的耐受性能，以保证所用生物指示剂的挑战性大于自然存在于产品内(或外)的微生物的挑战性。 生物指示剂对灭菌工艺的耐受性，与灭菌时其所处的环境条件，如生物指示剂包装材料对杀菌剂的穿透效果，芽胞溶液的pH值、粘度、金属离子的浓度等都是生物指示剂耐受性的主要影响因素。 如果因产品对灭菌条件敏感而无法采用过度灭菌工艺，则要根据灭菌前产品的含菌量资料来制定合理的灭菌工艺条件和选择适当的生物指示剂。 测试两个样品，分别在121℃暴热不同时间。 测定微生物含量，平皿计数法或经薄膜过滤。 残存微生物(Ns)均值取常用对数(lg)，并对相应的曝热时间u(以分钟为单位)作图，可得到存活曲线。 计算:Dl21℃＝u／(1gN0－lgNs) 曝热5min，lgN0为5，lgNs为2，则Dl21℃＝5／(5－2)＝1.7min。 D值为存活曲线斜率的负倒数(－1／K)。用线性回归方程， u为曝热时间(min)，y为存活菌落数的平均值，n 指实验组数。 一次加热就可估算出 D 值。 将一组样品(至少10 个样本)置于设定灭菌温度下，加热到设定时间后，取出并分别作无菌检查。 该方法检测灵敏度高于平板计数法。 DT=u／｛lg10N0－1g[2.3031g10(n／q)]｝ 式中n—样品总数， q—曝热处理后的无菌样品数，如果全都是阴性,则假定 q = n-1用于计算 Nt 。 每组至少需要10 个样品，将其置于预定温度下，设置不同的曝热时间，但曝热的时间间隔相同，无菌培养基中，培养结束时，记录每组样品中没有微生物生长的样品数。 芽胞完全杀灭(残存芽胞数小于1)时间(T)可用下式计算: T=Tk-d/2-(d/10)x∑F 其中，Tk指阴性分数范围的下限(全部不生长微生物所需最短时间)，d指暴热时间间隔, F每组中无微生物生长样品数。 选择全部生长组(0/10)中暴热时间最长者到全部不生长组(10/10)中暴热时间最短者之间的的数据计算D值。 两个时间分别是5分钟和15分钟。芽胞完全杀灭(小于1)时间(T)可用下式计算: T=15-2/2-(2/10) x 26 = 8.8分钟 假设N0=105，则D=8.8/ (5+0.2507)=1.7分钟 f/n 120℃下的暴热时间（min) 3 5 7 9 11 13 15 17 0/10 0/10 1/10 3/10 5/10 7/10 10/10 -- F -- 0 1 3 5 7 10 -- 在湿热灭菌条件下，实验测得细菌芽胞的z值在8-12℃之间，计算时z通常取10℃；在干热灭菌条件下，Z通常取20℃，去热原时Z通常取54℃ 。 分别测定同一种微生物在不同温度下(其他实验条件相同)的D值，以log10D与对应温度作图，就可以得到一条直线。 此直线斜率的负倒数即为温度系数-Z值，它反映了微生物的致死性随温度变化的特性。 Z=（Tl-T2)/log10 (D2/D1)， 其中，D1指温度为T1时的D值，D2指温度为T2时的D值。 * * 疯牛病毒是耐热的（transmitting animal spongiform encephalopathy agents=TSE） 图为人体致病菌分布，自然界有相似性 真菌孢子不称芽孢，如霉菌孢子，象一般的种，它们是不耐热的。 * * * * 细胞的形态在变，灭菌率当然也变化，故干热灭菌有较多的不稳定因素。 AutoCAD图 密封依靠压缩空气吹垫圈，压缩空气皮管老化，进了灭菌柜，蒸汽进不去，内压达1.5公斤时，温度只有116。此灭菌柜和原料脉动蒸汽灭菌柜是否同一供货商？ 本图为示意，冷却水进出管现实际在右侧。 参照仪实际即是一个标准温度计。铂电阻或热电偶二种中常只选用一种。图示二种均有，是示意。 验证时，采用相关产品的最低灭菌条件进行灭菌处理 灭菌程序结束后，将生物指示剂取出并清点数量并确认无误后，送至微生物室，于适当条件下培养检查。 阳性对照以及培养基的灵敏度。 在初始验证阶段，分别用生物指示剂在相同的灭菌条件下至少连续运行3次，以评价灭菌工艺条件的稳定性;在以后的定期再验证中，每次检测一批即可。 验证时的生物指示剂分布、腔室内的产品装载及指示剂的控制要求均与过热灭菌工艺验证时生物指示剂的使用原则相同。 与过热灭菌工艺相比，残存概率灭菌工艺的灭菌效力相对较低，用商购的普通生物指示剂无法实现对残存概率灭菌工艺的验证。 商购的生物指示剂一般用于验证F0值大于等于15分钟的灭菌工艺，而且在载体上的耐热性与在实际产品中的耐热性有相当大的差异。 直接将芽胞加到产品溶液内，因其耐热性较高，只能加人较少数量(如Dl21值为2.4分钟，则单位验证产品中的胞子数量