shRNA沉默VEGF基因表达对大肠癌细胞生物学特性的影响技术方案.docVIP

shRNA沉默VEGF基因表达对大肠癌细胞生物学特性的影响 　　　 提　要:目的　观察Pavu6+27-VEGF siRNA重组体在细胞体内表达的VEGF短发夹状RNA(short hairpin RNA, shRNA)对人大肠癌HCT116细胞株生物学特性的影响。方法　将自行构建的表达短发夹状RNA的重组质粒转染到大肠 癌HCT116细胞株中,以空质粒Pavu6+27转染为对照,经G418筛选出稳定表达shRNA细胞,行RT-PCR检测VEGF-mR- NA表达的改变,Western blot检测VEGF蛋白表达,流式细胞技术分析细胞周期分布,MTT比色法检测细胞的生长抑制率。结果　成功转染重组体的HCT116细胞中VEGF-mRNA表达明显下降,约降低为对照组的61. 2% (P0. 05)。VEGF蛋白 表达明显下降,光密度分析比较差异有显著性(P0. 05)。G0/G1期细胞比例增高,另一方面S期和G2/M期细胞比例降 低,细胞的增殖指数明显降低,实验组细胞增殖指数为(25. 63±4. 54)%,对照组细胞的增殖指数为(31. 90±2·19)% (P0·05)。结论　Pavu6+27-VEGF siRNA重组体在细胞内表达的短发夹状RNA能有效抑制人大肠癌细胞VEGF-mRNA和VEGF蛋白表达,细胞增殖能力减弱,为质粒介导的RNAi技术运用于大肠癌的基因治疗提供一定的