第8章_PCR技术及其应用-张静摘要.pptVIP

2、3’ RACE原理示意图 二、差异显示PCR (differential display PCR,DD-PCR) 检测相似材料表达谱差异的经典方法，此后已衍生出许多新方法。 ???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????? DD-PCR是在AP-PCR(任意引物PCR)基础上发明的一种RT-PCR方法，主要用于2种或多种类似生物个体在基因表达上的差异分析。 基本原理：所有真核生物的成熟mRNA都含有不同长度的poly+(A)尾部序列，根据poly+(A)内部的2个核苷酸排列的不同，可以将所有的mRNA分子分为12类。 根据这12种mRNA序列可合成12种相应的反转录引物，即M’N’TTTTTTTT……，用其分别进行反转录，即可将所有mRNA分类合成12种cDNA（于12个试管内），然后再用锚定引物和随机引物，以这12种cDNA分别做模板进行PCR扩增，那么与表型相关的mRNA就很容易被发现并克隆出来。 真核生物12种mRNA的序列特点 DD-PCR示意图 箭头所示为特异扩增产物 一、多重PCR (multiplex PCR)： 在一个反应体系中使用一对以上引物的PCR称为多