Nature Methods 度生命科学技术要点.ppt

基于BtoC的电子书店设计与实现 * * * * * Nature Methods 2010年度生命科学技术——光遗传学技术 冯 刚 遗 传 学 光遗传学技术 光遗传学技术简介 光遗传学技术的诞生 光遗传学控制细胞功能的基本步骤 光遗传学技术的应用举例 汇报内容 光遗传学技术 （一）光遗传学技术简介 光遗传学技术就是遗传学技术和光控技术结合之后产生的一项全新的技术。人们可以借助光遗传学技术对活体组织的特定细胞进行调控，开启或关闭某个已经被研究得非常清楚的细胞功能。 光遗传学技术包括的范围很广，其中最核心的技术是开发对光敏感并且可定向控制的材料或工具，而且这种材料或工具被光刺激之后还要能够展现出效应子功能（effector function）。除此之外，光学遗传学技术还包括其它一些辅助技术。 光遗传学技术 光信号进入被研究组织的技术 光敏材料进入被研究细胞的技术 获取输出信号的技术 分析这些数据，比如图像、电信号或某种行为活动等的技术 光遗传学辅助技术 光遗传学技术 （二）光遗传学技术的诞生 1979年，Francis Crick提出，神经科学领域面临的最大挑战是急需开发出一种控制技术，以期在不改变其它条件的情况下对大脑里的某种细胞进行操控。由于电刺激信号（electrode）无法对细胞进行精确的靶向刺激，而药物起效的速度又太慢，于是Crick考虑是否可以利用光控技术。但是，当时还没人知道如何让某种细胞对光刺激有反应。 神经科学家足足花了30多年时间才将遗传学技术和光控技术结合到一起，主要是因为人们不相信这种结合能起什么作用。大部分科学家都比较倾向多组分控制技术（muticomponent strategy）。 多组分控制技术不需要借助任何微生物视蛋白，而是采用多种基因级联式组合的方式，或者采用人工合成化学制剂与多种基因组合的方式。不过，这些外源性膜蛋白同样很有可能会给娇嫩的哺乳动物神经元细胞造成毒性伤害，而且使用该技术，进入细胞的光子流也可能会太弱、速度太慢，不足以发挥预期的调控作用。除此之外，科学家们也不相信仅靠发现的这几种视蛋白就能促使科研人员长期地研究单组分控制技术，因为微生物视蛋白需要在化学辅助因子全反式视黄醛是帮助下才能吸收光子信号。 光遗传学技术 2005年8月的一篇文章彻底改变了这一切。这篇文章称，神经元细胞只要表达了微生物视蛋白，完全不需要其他化学分子或任何物质的帮助就能够对光刺激做出精确的反应。至此，真正的光遗传学技术出现了。 到了2010年，人们已经证实了光敏感通道视紫红质蛋白、细菌视紫红质蛋白和嗜盐菌视紫红质蛋白都可以分别对各种颜色的光刺激做出反应，快速并安全地开启或关闭神经元细胞的功能。这是因为脊椎动物组织里天然就含有全反式视黄醛。 现在，光遗传学技术除了能对活体动物进行精确的时相控制之外，还能利用微生物视蛋白系统的这种单组分特性将光遗传技术推广到其他各个应用领域。 虽然光遗传学技术源自神经科学，但是并不局限于神经科学，它还可以广泛应用于生物学研究的各个领域。使用光遗传学技术可以对特定细胞里特定的生物事件在特定的时间给予特定的控制，而且最关键的是这种调控操作对生物体是无损伤的。这种控制技术意义重大，因为只有在整个细胞、组织乃至环境因素共同作用的大环境下研究特定的细胞事件才有意义。 光遗传学技术 （三）光遗传学控制细胞功能的基本步骤 第一步：寻找合适的光敏感蛋白 第二步：向细胞内输送编码光敏感蛋白的基因 第三步：对光刺激信号进行精确的时空操控 第四步：收集输出信号，读取结果 光遗传学技术 可以是天然蛋白，也可以是对天然蛋白进行化学修 饰之后得到的对光敏感的人工改造蛋白。 1.调控细胞膜电位 在神经元细胞中，细胞膜去极化之后会出现一个短暂的电信号。这种电信号的形成是神经元细胞相互交流的基础。 要实现调控细胞膜电位的目的，方法之一是使用经过化学修饰的、名为“被束缚的”配体。这种配体在光刺激下会被激活，与细胞内的另一种外源性受体结合。这种配体还可以通过一种起到光学开关作用的光敏感复合物与受体结合。无论哪种方法与受体结合，这种配体的最终目的都是让细胞或组织获得光敏感性。 也可以使用编码天然光敏感蛋白，比如视蛋白的基因。这类光敏感跨膜蛋白都与生色基团视黄醛或各种视黄醛的异构体，比如反式视黄醛或顺式视黄醛等共价结合。 第一步：寻找合适的光敏感蛋白 光遗传学技术 第一个基于视蛋白对哺乳动物神经元细胞进行光控操作的遗传编码系统是一种源自黑腹果蝇的三基因系统。 最近发现微生物编码的视蛋白也能调控神经元细胞的膜电位信号，这类蛋白除了具有光敏感结构域之外还含有离子通道或离子泵结构域。 ChR2蛋白：第一个被使用的，非选择性阳离子通道蛋白，在蓝光的照射下会立即使神经元细胞发生去极化反应，诱发峰电位。 ChETA、SFO、VCh