CRISPRCas技术解读.pptVIP

CRISPR/Cas9系统及其应用 Introduction and Applications of CRISPR-Cas9 for Genome Engineering Anliang Dong Apr.16th,2015 CRISPR-Cas系统简介 CRISPR-Cas系统的应用技术 CRISPR-Cas系统的应用前景 What is the CRISPR/Cas？ CRISPR/ Cas ---- Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats/CRISPR-associated proteins CRISPR loci Consist of the signature CRISPR array and CRISPR-associated (Cas) genes CRISPR array a series of repeat sequences (direct repeats) interspaced by variable sequences (spacers) corresponding to sequences within foreign genetic elements (protospacers) CRISPR arrays are first transcribed as a single RNA before subsequent processing into shorter CRISPR RNAs (crRNAs) that is also called sgRNA (short guide RNA ) Cas genes----CRISPR-associated genes which are translated into proteins direct repeats spacers 1. CRISPR-Cas系统的研究历史 1.1 CRISPR-Cas系统的研究历史 1987 年，日本课题组在K12 大肠杆菌的碱性磷酸酶基因附近发现串联间隔重复序列，随后发现其广泛存在于细菌和古细菌的基因组中，2002 年，正式将其命名为成簇的规律间隔的短回文重复序列 2005 年发现CRISPR 的间隔序列(spacer)与宿主菌的染色体外的遗传物质高度同源，推测细菌可能通过CRISPR 系统可能以类似于真核生物的RNAi 方式抵抗外源遗传物质的入侵。 2007 年，Barrangou 等首次发现细菌可能利用CRSPR 系统抵抗噬菌体入侵；2008 年，Marraffini 等发现细菌CRISPR 系统能阻止外源质粒的转移，首次利用实验验证了CRISPR 系统的功能 2013 年初，MIT 的研究组首次利用CRISPR/Cas9 系统对人293T 细胞EMX1 和PVALB 基因以及小鼠Nero2A 细胞Th 基因实现了定点突变。同年Mali 利用CRISPR/ Cas9 在人293T 细胞和K652 细胞基因的靶位点形成双链或单链的切口，从而激活细胞的DNA 修复机制高效介导外源基因定点插入。 1.2CRISPR-Cas系统的结构 CRISPR-CAS 系统的组成主要包括: 由不连续的重复序列R( repeat) 与长度相似的间区序列S( spacers) 间隔排列而成的CRISPR 簇，前导序列L( leader) 以及一系列CRISPR 相关蛋白基因cas。 Cas蛋白是一种双链DNA核酸酶，能在guide RNA引导下对靶位点进行切割。它与folk酶功能类似，但是它并不需要形成二聚体就能发挥作用。 CRISPR/ Cas ---- Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats/CRISPR-associated proteins CRISPR loci Consist of the signature CRISPR array，CRISPR-associated (Cas) genes and CRISPR array a series of repeat sequences (direct repeats) interspaced by variable sequences (spacers) corresponding to sequences within foreign genetic elements (protospacers) CRISPR arrays are first transcribed as a single RNA before subsequent proces