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第九章 酶催化反应 游离酶使用中的局限性: 1.提取纯化繁琐,价格昂贵。 2.反应之后要从反应混合物中回收有活性的酶以重复利用，在技术上有很大难度，所以难以重复使用 。 3.稳定性差，不能在有机溶剂、强酸、强碱或者高温下使用，有些酶即使在较合适的条件下使用，也会很快失活。 克服游离酶缺点的方法: 1.人工合成酶 使用有机合成以及聚合物化学中的最新技术来合成具有像酶那样活性的催化剂。称这种催化剂是“人工合成酶”，这种方法难度大，成本高，工业价值不大。 2. 酶的“改性”、“修饰”以适应实际使用的条 件。酶和细胞的固定化是其中一个重要方面 凡限制在一定的空间范围内并能连续反复地使用的酶都称为固定化酶.通过适当方法制成的不溶于水的酶都能满足这一定义。 固定化酶的优点: 可连续重复使用，稳定性高 由于不同领域的科技工作者共同努力，已经制得稳定的，可以反复使用不溶于水的固定化酶制品，，并且，这一旨在更有效地利用酶的活性和专一性的科学技术，已发展成为一门新兴的科学—酶工程学，它的研究内容包括：酶和细胞的固定化方法；固定化酶的反应动力学和扩散效应；辅酶和辅因子的固定化；酶反应器系统的设计和分析；以及固定化酶和固定化细胞的工业应用。 固定化细胞技术 固定化细胞就是被限制自由移动的细胞，既细胞受到物理化学等因素约束或限制在一定的空间界限内，但细胞仍保留催化活性并具备能被反复或连续使用的活力。是在酶固定化基础上发展起来的一项技术。 固定化细胞的优点 1、与游离细胞发酵相比，固定化细胞发酵具有以下优点： （1）固定化细胞可以将微生物发酵改为连续酶反应 （2）可以获得更高的细胞浓度；（3）细胞可以重复使用； （4）在高稀释率时，不会产生洗脱现象；（5）单位容积的产率高； （6）提高遗传稳定性； （7）细胞不会受到剪切效应的影响。（8）发酵液中菌体含量少，有利与产品的分离纯化。 2、与固定化酶相比，固定化细胞具有以下优点： （1）免去了破碎细胞提取酶的手续 （2）酶在细胞内的稳定性较高，完整细胞固定化后酶活性损失少 （3）固定化细胞制备的成本比固定化酶低（4）无需辅酶再生 虽然固定化细胞具有上述许多优点，但也有不足之处，具体表现在： 1、仅能利用胞内酶； 2、细胞膜、细胞壁和载体都存在着扩散限制作用； 3、载体形成的孔隙大小影响高分子底物的通透性； 4、可能有副反应。 第一节 酶催化反应 一、酶和细胞的固定化方法 酶的本质是蛋白质，酶的固定化实际上是具有催化活性的蛋白质的固定化。酶的催化活性主要依赖于它的特殊的高级结构----活性中心,因此在制备固定化酶时必需严格操作条件,尽可能避免酶的高级结构受损. 一般说来，酶的固定化方法有吸附法（Adsorption ）、包埋法（Entrapment ）、交联法（Cross linking ）、化学共价法（covalent bonding ）、酶的逆胶束包囊法（Encapsulation 微囊束法）等。常用的载体有活性碳、多孔玻璃、纤维素、交联葡聚糖、琼脂糖。海藻酸盐、明胶以及一些合成的高分子化合物等。 一、酶和细胞的固定化方法 吸附法是将酶溶液与吸附剂表面接触就能达到吸附结合。是利用载体和酶表面所带电荷的静电引力使酶吸附于载体上。吸附法可分为物理吸附和离子吸附两种。是一种最简单、最经济的方法。 蛋白质与载体之间的结合相当弱,而且很多情况下,酶的非特异性吸附常常会引起部分或全部失活,高浓度的盐溶液或底物溶液又将加速蛋白质的脱附.因此当要求酶的固定绝对牢靠时,采用吸附法是很不可靠的. 1、吸附法（Adsorption 酶的吸附剂类型 1）各种矿物质以及无机载体可以用作酶的吸附剂。例如高岭土、皂土、磷酸钙、多孔玻璃、氧化铝、氧化铁、氧化钛等。 矿物质和类似无机吸附剂的蛋白质结合量通常很低。每克吸附剂的吸附量通常小于1mg酶蛋白，直径100-200um不锈钢粒子在用氧化汰处理后可以成为有效的酶吸附剂。 2）纤维素粉也可以作为吸附剂，酶蛋白主要吸附在纤维素微晶结构发生部分断裂的表面处。 酶的吸附剂类型 3）最常用的吸附剂是离子交换剂。 如，羧甲基纤维素,DEAE----纤维素,DEAE----葡萄糖以及合成的阴离子和阳离子交换剂。多糖类的离子交换剂的蛋白质结合量很高，达到50-150mg酶蛋白/g载体。固定化氨基酰化酶是第一个用于工业生产的固定化酶，用于N-乙酰DL-氨基酸的外消旋混合物的连续拆分。 离子交换剂主要靠静电吸引,缺点是当离子强度增加或介质的pH、温度变化时,这种结合发生分解.如通过化学方法增加酶蛋白上的电荷（？）则可以使这种影响得到改善