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（二）纯度测定 人免疫球蛋白采用乙酸纤维素薄膜电泳法（《中国药典》2005年版三部附录IV A）测定纯度。具体方法如下。 试剂 巴比妥缓冲液（PH 8.6）：称取巴比妥2.76g、巴比妥钠15.45g,,加水溶解使成1000ml。 氨基黑液染色液：称取氨基黑10B 0.5g，溶于甲醇50ml、冰醋酸10ml及水40ml的混合液中。 漂洗液:量取乙醇45ml、冰醋酸5ml及水50ml，均匀。 透明液:量取冰醋酸25ml、无水乙醇75ml，混匀。 透明液：量取冰醋酸25ml、无水乙醇75ml,混匀。 测定 取乙酸纤维素薄膜，裁成2cm×8cm膜条，将无光泽面向下，浸入巴比妥缓冲液（PH8.6）中，待完全浸透，取出夹于滤纸中，轻轻吸去多余的缓冲液后，将膜条无光泽面向上，置含巴比妥缓冲液（PH8.6）的电泳槽架上，通过滤纸桥，浸入巴比妥缓冲液（PH8.6）中。于膜条上距负极端2cm处，条状滴加蛋白质含量约5%的供试品溶液2~3μL,在0.4~0.6mA/cm[总电流量=电流量（mA/cm）×每条膜的宽度（cm）×膜条数电流条件下电泳；同时取新鲜人血清做对照，电泳时间以白蛋白与丙种球蛋白之间的电泳展开距离约2cm为宜。电泳完毕，将膜条取下浸于氨基黑染色液中，2~3min后，用漂洗液浸洗数次，直至脱去底色为止。将洗净并完全干燥的膜条浸于透明液中，待完全浸透后，取出平铺于洁净的波板上，干燥后即成透明薄膜，可供测定纯度和做标本长期保存。将干燥的乙酸纤维素薄膜用色谱扫描仪采用反射（未透明薄膜）或透射(已透明薄膜)方式在记录器上自动绘出各蛋白质组分曲线图，以人血清作对照，按峰面积计算各蛋白质组分的含量（%）。各蛋白质总量应不低于标示蛋白质总量的90.0%。 （三）含糖量 在人免疫球蛋白生产过程中，通常加入一定量的葡萄糖或麦芽糖作为稳定剂。但如加入量过多，则会影响病毒灭活效果，并有可能在使用过程中产生不良反应。因此，对葡萄糖或麦芽糖含量进行监控是十分必要的，常用高效液相色谱伐进行测定，应不高于50g/L。 色谱条件于系统适应性试验 用苯乙烯-二乙烯 苯基共聚物为基质的阳离子交换色谱柱（H+），粒度9μm或8μm，内径7.8mm，注长300mm；注温50℃（测定蔗糖含量时，注温为20~30℃）；流动相为0.004mol/L硫酸溶液，流速为0.8mL/min；示差折光检测器。取2%麦芽糖1mL和1.5%磺基水杨酸1mL的混合物20μL,注入色谱柱，记录色谱图，麦芽糖与磺基水杨酸两峰间的分离度应大于1.5，拖尾因子按麦芽糖峰计算应为0.95~1.20。 对照品溶液的制备 （1）麦芽糖对照品溶液的制备 分别取经减压干燥至恒重的麦芽糖对照品1.0g、2.0g、3.0g，精密称定，各置100mL容量瓶中，分别加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。 （2）葡萄糖对照品溶液的制备 分别取经减压干燥至恒重的葡萄糖对照品0.5g、1.0g、1.5g，精密称定，各置100mL容量瓶中，分别加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。 3.供试品溶液的制备 精密量取供试品1M，加1.5%磺基水杨酸4.0mL，混匀，室温放置至少2h，以3000r/min离心10min，取上清液，即得。 4．测定 精密量取对照品溶液与供试品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，进样量为20μL。 5.计算 以各对照品溶液浓度（mg/mL）对峰面积作直线回归，求得回归方程，计算出供试品溶液中含糖量（A），再按下列公式计算 A×n 供试品麦芽糖或葡萄糖含量（mg/mL）= ---------------- (12-3) 进样量(mL) 式中 A—供试品溶液中麦芽糖或葡萄糖含量，mg； n—供试品稀释倍数。 6.附注 根据供试品的含糖量，对照品和供试品的取量可作适当调整。直线回归相关系数应不低于0.9999。.不同厂家的阳离子交换色谱柱（H+）的流速、流动相、注温等会有所不同，可根据色谱柱说明书对色谱条件进行适当调整。 （四）分子大小分布 由于人免疫球蛋白在一定条件下，尤其是受热后易于聚合，形成的二聚体含有更多的抗自身抗体的抗体，对于中和自身抗体有重要作用，而多聚体与抗补体活性有关，易引起类过敏反应。故对本品种蛋白质分子大小公布进行检查，以测得所含单体和二聚体的含量。多采用排阻色谱法测定IgG单体与二聚体含量，限度要求IgG单体与二聚体含量之和应不低于90.0%。具体方法如下。 1.色谱条件与系统适应性试验 用清水硅胶高