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荧光定量PCR技术 生化教研室 一、实验目的 掌握荧光定量PCR的原理 熟悉荧光定量PCR的操作步骤。 二、实验原理 ABI Prism?7500型荧光定量PCR仪 7500功能一览： ?绝对定量(Absolute Quantification) –自动计算基线、阈值、CT值、浓度、百分比 ?相对定量(Relative Quantification) ?等位基因分型(Allelic Discrimination) ?阴阳性鉴定(Plus/Minus with IPC) 实时荧光定量 PCR技术原理 聚合酶链式反应（PCR）可对特定核苷酸片断进行指数级的扩增，扩增反应结束后，可通过凝胶电泳的方法对扩增产物进行定性分析，也可以通过放射性核素掺入标记后的光密度扫描来进行定量分析。无论定性还是定量分析，分析的都是PCR终产物。 实时荧光定量PCR 通过对PCR扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。在实时荧光定量PCR反应中，引入一种荧光化学物质，随着PCR反应的进行，PCR反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一个荧光强度信号，这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线图 三、 五、实时荧光定量 PCR技术的应用 六、思考题 1. 荧光定量PCR的应用。 2. 使用SYBR Green I作荧光染料，如何提高荧光定量PCR结果可靠性？ 七、实验报告 每人写一份实验报告，交至：10号楼10楼1012室 包括：目的、原理、操作注意事项、结果、讨论 * 研究生实验 四、 *
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