第二章 色谱法导论要点.pptVIP

第一节 概述 在进行植物绿叶中色素时，采用石油醚进行淋洗，并将其注入一根装有碳酸钙颗粒的玻璃管上端，在加入纯净的石油醚进行淋洗。 色谱分离法的原理：当混合物随流动相流经色谱柱时，就会与固定相发生作用，由于各组分在物理化学性质和结构上的差异，与固定相发生作用的大小、强弱程度不同，因此在同一推动力的作用下，不同组分在固定相中的滞留时间不同，从而使混合物中各组分按一定顺序，先后从色谱柱中流出。 一、按两相状态分类 以气体为流动相的色谱法称为气相色谱法。根据固定相是固体吸附剂还是固定液，气相色谱又分为气固色谱法和气液色谱法。以液体为流动相的色谱法称为液相色谱法。同理又分为液固色谱法和液液色谱法。 流动相为超临界流体的色谱分析法称为超临界流体色谱。 通过化学反应，将固定液键合到载体表面，这种化学键合固定相的色谱称为化学键合相色谱。 二、按固定相的外形及性质分类 柱色谱法：填充柱色谱和固定相附着或键合在管内壁上的空心毛细管柱色谱。 平板色谱法：薄层色谱 纸色谱法 三、按分离原理分类 利用固体固定相表面对样品中各组分吸附能力强弱的差异而进行的分离方法称为吸附色谱法。 利用组分在固定相和流动间分配系数不同而进行分离分析的色谱法称为分配色谱法。 利用离子交换剂（固定相）对各组分的亲和力的不同而进行分离的色谱法称为离子交换色谱。 利用大小不同的分子在多孔固定相中的选择渗透而进行分离的方法称为凝胶色谱法或尺寸排阻色谱法。 固定相为亲脂性凝胶，流动相为有机溶剂的色谱称为凝胶渗透色谱法。 固定相为亲水性凝胶，流动相为水溶液的色谱称为凝胶过滤色谱。 第二节 色谱流出曲线和有关术语 2、基本术语 1、基线 无试样通过检测器时，检测到的信号即为基线。 2、色谱峰 1）峰高 2） 区域宽度 某色谱峰，其峰高0.607倍处色谱峰宽度为4mm，半峰宽为（ ）。 4.71mm B. 6.66mm C. 9.42mm D. 3.33mm 3）峰面积 A=1.065h×W1/2 3、保留值 保留值是组分在色谱柱中滞留时间的数值，或在柱中滞留时间内所消耗的流动相体积。 可作为定性分析的参数 1）死时间tM、死体积VM 不被固定相滞留的组分，从进样到出现峰最大值所需的时间称为死时间。 μ=L/tM 对应死时间所需的流动相称为死体积VM VM=tMFco 2）保留时间tR、保留体积VR 组分从进样到出现色谱峰顶点所需的时间称为该组分在柱内的保留时间tR。 组分在柱内的平均线性速率uL为L/tR 对应于保留时间所消耗的流动相体积称为保留体积VR VR=tRFco 3）调整保留时间t′R、调整保留体积V′R 扣除死时间后的保留时间称为调整保留时间t′R = tR－tM 调整保留体积（VR＇）： V′R= VR－VM 4） 相对保留值r21 组分2与组分1调整保留值之比： r2,1= t′R2/t′R1=V′R2/V′R1 相对保留值只与柱温和固定相性质有关，与其他色谱操作条件无关，它表示了固定相对这两种组分的选择性。 在色谱定性分析中，通常选择一个前出峰的调整保留值t′RS作为基准，然后再求得其他后出峰组分i对基准峰的相对保留值，此时用符号α表示。 α为选择因子。 α = t′Ri /t′RS = V′Ri /V′RS 从色谱峰可以得到以下信息： 根据色谱峰的各种保留值，可以进行定性分析 根据色谱峰的面积、峰高可以进行定量分析 根据色谱峰的保留值及其区域宽度，可以评价色谱柱的分离效能以及相邻两色谱峰的分离程度 根据色谱峰两峰间的距离，可以评价固定相或流动相的选择是否得当 根据色谱峰的个数，可以判断所含组分的最少个数。 第三节 色谱分析的基本理论 热力学因素 动力学因素 色谱分析的基本理论 塔板理论 速率理论 一、分配平衡 1、分配系数K K值小的先流出。 2. 分配比 在一定温度和压力下，某一组分分配达到平衡时，分配在固定相和流动相中的质量比。 组分在固定相中的质量 组分在流动相中的质量 3、保留比Rs与分配比k的关系 组分在柱内的平均线速度uL与相同条件下流动相在该柱内的平均线速率u之比称为保留比（滞留比），用Rs表示 Rs= uL / u=tM/tR Rs=组分在流动相中的总质量/柱内流动相和固定相中组分的总质量 =mm/(mm+ms)=1/(1+k) 由上两式可得tR=tM(1+k) k=(tR-tM)/tM= t′R/tM= V′R/VM t′R=tMk=tMKVs/Vm tR=tM(1+KVs/Vm) VR=VM(1+KVs/Vm)=VM(1+k)=VM+KVs α= t′R2/tR1 = V′R/VM=k2/k1=K2/K1 二