2015酶工程绪论解析.pptVIP

* 四、酶工程研究的技术方法 酶的分离纯化 酶的固定化 酶蛋白的化学修饰 侧链修饰 酶的亲和修饰 酶的化学交联 酶分子的定向改造 * 酶工程的发展趋势 从新生物资源中发掘新酶 （极端环境生物资源） 依靠微生物基因组测序结果发现新酶 借助定向进化和DNA重排技术创造新酶 * 生物酶工程示意图 酶的蛋白质结构功能 新酶分子蓝图 选择性修饰方案 突变酶 新酶 克隆酶 产品 效用 发展 酶基因 遗传设计 遗传修饰 DNA重组技术 DNA重组技术 * 思考题： 1. 酶工程的研究内容与方法 2. 酶工程发展重要里程碑 3. 酶工程发展趋势 实际上有了酶的固定化技术，酶在工业生产中的利用价值才真正得以体现。 * 要准确地说出酶是什么时候、由谁首先发现的，那是件很困难的事。人们很早就感觉到它的存在，但是真正认识它、利用它还只是近百年的事。我国从有记载的资料得知，4000多年前的夏禹时代酿酒已盛行。酒是酵母发酵的产物，是细胞内酶作用的结果。 公元10世纪左右，我国已能用豆类做酱。豆酱是在酶菌蛋白酶作用下，豆类蛋白质水解所得的产品。 约3000年前，利用麦曲含有的淀粉酶将淀粉降解为麦芽糖，制造了饴糖。 用酶治疗消化障碍症也是我国人民的最早发现。曲富含酶和维生素，至今仍是常用的健胃药。 春秋战国时代，漆已被广为利用，那时所用的漆是漆树的树脂被漆酶作用的氧化产物。 * 有人认为Payen和Person首先发现了酶。 1878年德国Kuhne(库尼)首先把这类物质称为Enzyme。Enzyme来自希腊文，原意为“在酵母只中。中文译为酶，说明我国古代对酶的性质、作用已有相当认识。 1896年德国学者Buchner(巴克纳)兄弟发现了用石英砂磨碎的酵母细胞或无细胞滤液能和酵母细胞一样将1分子葡萄糖转化成2分子乙醇和2分子CO2，他把这种能发酵的蛋白质成分称为酒化酶(eymase)，表明了酶能以溶解状态、有活性状态从破碎细胞中分离出来而非细胞本身，从而说明了上述化学变化是由溶解于细胞液中的酶引起的。此项发现促进了酶的分离和对其理化性质的探讨，也促进了对有关各种生命过程中酶系统的研究。 一般认为酶学研究始于1896年Buchner(巴克纳)的发现。 并获得1947年的诺贝尔奖。 米氏学说对酶反应机理的研究是一个重要突破。 * 苯丙氨酸代谢途径关系到三种遗传病 * 在酶的应用过程中，人们注意到酶的一些不足之处，如：稳定性差，对强酸碱敏感，只能使用一次，分离纯化困难等。 解决的方法之一是固定化。 * 自然酶在工业应用上受到限制的原因主要有： ①大多数酶脱离其生理环境后极不稳定，而酶在生产和应用过程中的条件往往与其生理环境相去甚远； ②酶的分离纯化工艺复杂； ③酶制剂成本较高 * 固定化酶较自由酶具有很多优点： ①稳定性高； ②酶可反复使用； ③产物纯度高，副产物少，从而有利提纯； ④生产可连续化、自动化； ⑤设备小型化，节约能源等。 * 固定化酶的基础上逐渐发展固定化细胞技术 近年来，后来居上的固定化细胞技术发展更为迅速，在实际应用方面已大大超过固定化酶。 在工业应用方面，利用固定化酵母细胞发酵生产酒精、啤酒的研究较引入注目。 日本Toshio Onaka 等用海藻酸钙凝胶包埋酵母细胞，可在一天内获得质量优良的啤酒。 法国Corriell 等将酵母细胞固定在聚氯乙烯碎片和多孔砖等载体上进行啤酒发酵中型试验，可连续运转8个月。 中国上海工业微生物研究所等单位也从20世纪70年代后期进行过类似的研究工作，用固定化酵母发酵啤酒的规模不断扩大，已正式投入大规模生产。 10 因此固定化酶研究仍是酶工程研究的中心 * 酶分子的改造和修饰 酶制剂的应用并不一定都需要固定化，而且需要固定化的天然酶也仍有必要提高其活力，改善其某些性质，以便更好地发挥酶的催化功能。 由此而提出了酶分子的改造和修饰。 在第七届国际酶工程会议上，以酶分子改造和修饰为主要内容的提高酶稳定性的研究占较大比例，它与基因工程的应用、活细胞的固定化一起，成为1983年国际酶工程会议最为活跃的三大领域。 * 4 通常将改变酶蛋白一级结构的过程称为改造，而将酶蛋白侧链基团的共价变化称为修饰。 酶分子经加工改造后，可导致有利于应用的许多重要性质与功能的变化。如德重等利用蛋白水解酶的有限水解作用，已将L-天冬氨酸酶的活力提高3～6倍。 美国Davis等人还利用蛋白质侧链基团的修饰作用，研究降低或解除异体蛋白的抗原性及免疫原性。以聚乙二醇修饰治疗白血病的特效药L-天冬酰胺酶，使其抗原性完全解除。 11 * 基因工程与酶工程相结合 1980年，Wagner等人报道，将大肠杆菌ACTT11105的青霉素酰化酶基因克隆到质粒