09-蛋白质代谢技术分析.ppt

核糖体的组成 核糖体是蛋白质合成的工厂 原核细胞70S核糖体的A位、P位及mRNA结合部位示意图 成 肽 移 位 在EF - G（移位酶）的作用下，核糖体沿mRNA 5’→ 3’的方向移动，每次移位距离为3个核苷酸，结果使肽酰 - tRNA从A位移到P位，原来在P位的无负荷tRNA随即离开核糖体，同时一个新的密码子进入空着的A位 延长因子EF-G有转位酶( translocase )活性，可结合并水解1分子GTP，促进核蛋白体向mRNA的3侧移动 。 fMet A U G 5 3 fMet Tu GTP 在肽链延长阶段中，每生成一个肽键，都需要直接从两分子GTP（移位时与进位时各1）获得能量（GTP→GDP+H3PO4+能量），即消耗两个高能磷酸键。 在氨基酸被活化生成氨基酰tRNA时，也消耗两个高能磷酸键。 所以蛋白质合成过程中，每生成一个肽键实际上需消耗四个高能磷酸键。 （2）肽链合成的延长（能量消耗） （3）肽链合成的终止和释放 （1）在mRNA上识别终止密码子（如UAA，UAG，UGA），它们不能被tRNA阅读，而是被肽链释放因子识别 （2）水解所合成肽链与tRNA间的酯键而释放出新生的蛋白质 终止反应包括： 终止反应需要R1、R2及R3三个辅助因子（肽链释放因子）。R1对识别终止密码UAA及UAG是必须的，R2对识别UAA和UGA是必要的，R3影响多肽链的释放速度。 （3）肽链合成的终止和释放 U A G 5 3 RF COO- 四、蛋白质运输及翻译后修饰 1．N端的处理：以脱甲酰基酶催化水解除去N端的甲酰基，然后在氨肽酶的作用下切去一个或多个N端氨基酸。 2．在特异的肽酶作用下除去N端信号肽段（15－30氨基酸组成，用以指导合成的蛋白质去往细胞的固定部位）。 3．某些氨基酸（丝、苏、酪）羟基的磷酸化。 4．mRNA中没有胱氨酸的密码子，二硫键是通过两个半胱氨酸的巯基氧化形成的。 5．某些氨基酸的侧链要经专一性的改变，如胶原蛋白脯氨酸和赖氨酸的羟基化。 6．有些新生的多肽链要在专一性的蛋白酶水解作用下，去掉部分肽段后，才能转变成有功能的蛋白质。 7．由各个肽链及其它辅助成分（脂类、核酸、血红素）等构成的蛋白质，在多肽链合成后，还需经过多肽链之间以及多肽链与辅助成分的缔合作用，才能形成有活性的蛋白质。如加糖基、多肽折叠等。 第五节 蛋白质代谢的调节 一、鸟氨酸循环的调节 二、氨基酸生物合成的调节 一、鸟氨酸循环的调节 在鸟氨酸循环酶系中精氨酸琥珀酸合成酶的活性最低，为合成的限速酶，可通过调节此酶来调节尿素的合成量。 二、氨基酸生物合成的调节 1、通过酶活的调节 包括：协同、积累、顺序反馈抑制和同工酶调节。 2、酶生成量的调节 包括：诱导和阻遏。 2、tRNA的作用原理（tRNA结构） 载运氨基酸 反密码子 2、tRNA的作用原理（tRNA结构） （1）3’-端-CCA上的氨基酸接受位点 （2）识别氨酰- tRNA合成酶的位点 （3）核糖体识别位点，使延长中的肽链附着于核糖体上 （4）反密码子位点 tRNA分子上与蛋白质合成有关的4个位点： 3、核蛋白体（rRNA）的作用原理 附着在mRNA上的核蛋白体从起动信号沿着mRNA长链逐渐向终止信号移动。 在移动的同时，由带着氨基酸的tRNA辨认，并译出mRNA的密码子。每译一个新的密码子，就进入一个带有氨基酸的新tRNA。 rRNA每向前移动一个密码子的位置，肽链上即增加一个氨基酸，移动过程就是翻译。 rRNA不断向前移动，肽链不断增长，接近终止信号时，翻译过程即告结束。核蛋白体脱落，多肽链也即释出。 原核生物核糖体的组成 34 protein 21 protein 23S RNA 5S RNA 16S RNA 50S subunit 70S ribosome 30S subunit 原核生物核糖体结构示意图 30S subunit 50S subunit 原核生物mRNA 5’端的SD序列 ——识别16S rRNA 核糖体结合位点序列 anticodon codon 30S 与mRNA结合部位 P位（结合或接受肽基的部位） A位（结合或接受AA- tRNA的部位） 50S 5? 3? mRNA 3、核蛋白体的作用原理 3、核蛋白体的作用原理 三、蛋白质的合成—翻译 （一）肽链延伸及mRNA翻译方向 （二）原核生物蛋白质生物合成过程 （一）肽链延伸及mRNA翻译方向 合成需要大约300种生物大分子参与，其中包括tRNA、mRNA、rRNA、可溶性蛋白质因子等。 多肽链的合成是从N端向C端进行的。 mRNA上信息的阅读（翻译）是从mRNA的5’端向3’端进行的。 （二）原核生物蛋白质生物合成过程 1、氨基酸的活化与转运 2、在核