实验二PCR技术及其应用资料祥解.ppt

实验二 孔忠新 2015.10.13 聚合酶链式反应 Polymerase Chain Reaction, PCR “经过DNA变性，与合适的引物杂交，用DNA聚合酶延伸引物，并不断重复该过程便可克隆tRNA基因”。 —— Korana于1971年 1985年美国PE-Cetus公司人类遗传研究室的Mullis等发明了具有划时代意义的聚合酶链反应。其原理类似于DNA的体内复制，只是在试管中给 DNA的体外合成提供以致一种合适的条件： 模板DNA， 寡核苷酸引物， DNA聚合酶， 合适的缓冲体系， DNA变性、复性及延伸的温度与时间。 PCR技术基本原理 类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。 变性--退火--延伸 变性：加热至93℃左右一定时间后，模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备 退火(复性)：模板DNA变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合 延伸：模板-引物结合物在Taq聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA 链互补链，这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需 2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。 图 PCR扩增DNA原理示