1.蛋白质与酶工程绪论讲解.pptVIP

蛋白质与酶工程 绪 论 检验医学院 张雪梅 apoe@163.com 关于考核 平时成绩：20-30% 考勤 平时作业或设计 期末考试：70-80% 额外的、主动的互动交流：酌情加分 本讲纲要 1 相关概念 2 蛋白质工程概述 3 酶工程概述 1 相关概念 1-1 科学、技术或工程 科学 技术 工程 之间的关系？ 1 相关概念 1-1 科学、技术或工程 科学与技术是两个不同的概念，它们之间既有明确的区别，又有紧密的联系 通常合称为“科学技术” 科学：探讨“是什么”，即认识自然、发现自然规律 技术：解决“如何做”，有目的，有发明 一切能够在市场上有竞争力，获得市场承认，推动市场发展的知识都可以称为技术。 1 相关概念 1-1 科学、技术或工程 工程： 以某组设想的目标为依据，应用有关的科学知识和技术手段，通过一群人的有组织活动将某个（或某些）现有实体（自然的或人造的）转化为具有预期使用价值的人造产品过程。 它的成功有赖于多种科学技术的综合集成和科学的管理。 工程学家—未来的你们 要具有科学家的知识 要具有艺术家的眼光 要有哲学家的思维 要有经济学家的头脑 把原材料“雕塑”成有市场价值的工艺品 1 相关概念 1-2 生物工程( Bioengineering, Biologic engineering) 以生命科学为基础，利用生物体系和工程原理生产生物制品和创造新物种的综合性科学技术 是现代生物学工程技术的总称，主要包括： 遗传工程（基因工程） 蛋白质工程 细胞工程 微生物工程(发酵工程) 酶工程(生化工程) 不同的生物工程 2 蛋白质工程（Protein Engineering） 2-1 定义： 以蛋白质分子的结构与功能的关系作为基础 通过理化和DNA重组等方法对基因和蛋白质进行有目的地设计、修饰和改造 最终获得满足人类生产和生活需求的新型蛋白质（天然蛋白质的改造，或是纯新蛋白质） 这样的理论和实践活动即蛋白质工程。 2-2 诞生和崛起 1）诞生于基因工程问世10周年之际 2）蛋白质工程迅速崛起. why? （1）基因工程生产自然界已存在的蛋白质 ** 长期进化而来，其结构和功能符合特定物种的需要 ** 却未必完全符合人类生产和生活的需要 例：工业生产中常有强酸、强碱、高温、有机溶剂存在，因此需要稳定性非常好的酶；天然酶中很少能满足此需要 （2）结构生物学能够分析蛋白质分子的精确立体结构及其与生物功能的关系，从而为设计和改造天然蛋白质提供蓝图 （3）以定点突变为中心的基因操作技术为蛋白质工程提供手段 提高干扰素效应 赵广荣等采用组合突变策略，对人干扰素α2b（rh-INF α2b）的第52-53-55、103-107和121-125位氨基酸残基定向突变; 获得了新型重组基因序列。将突变基因连接于原核表达载体pET28a上进行诱导表达; 所获得的新型rh-IFN α2b的进行抗病毒活性效价检测，其活性达9.3×107 IU/mg，比野生型rh-IFN α2b 高93倍（1×106 IU/mg）。 2-4 蛋白质工程与基因工程的关系 1）都以中心法则为理论基础 2）蛋白质工程是基因工程的发展 ----第二代基因工程 第一代：经典基因工程—自然界已有蛋白或多肽基 因的高效表达 第二代：蛋白质工程,基因定向突变→有新功能的蛋白质 在有限的时空条件下快速实现的、自然界需要跨越巨大时空的进化和选择。 2-5 蛋白质工程的核心内容（1） 1.蛋白质结构分析 收集大量的蛋白质分子结构信息，建立结构与功能的关系的数据库，为阐明蛋白质结构与功能的关系奠定基础。 三维空间结构的测定是验证蛋白质设计（即新结构是否产生了新功能）是必需手段。 晶体学技术在确定蛋白质结构方面有了很大发展，但是其最明显的不足是其需要分离出一定量（数mg-数十mg）的纯蛋白才能制备出单晶体，再进行繁杂的数据收集和计算、分析 2-5 蛋白质工程的核心内容（2） 2-5 蛋白质工程的核心内容（3） 3.蛋白质的改造和创造 *理化法：变性/复性、修饰其侧链官能团、分割肽链、改变表面电荷分布促进蛋白质形成一定的立体构象等 *生化方法：用蛋白酶选择性酶切蛋白质 用糖苷酶、酯酶、酰酶等去除或连接不同化学基团等 但是，该法对相同