第五、六章分子生物学研究方法祥解.ppt

第五章 分子生物学研究方法 第一节、重组DNA技术发展史上的重大事件 第二节、DNA基本操作技术 第三节、基因克隆的主要载体系统 第四节、基因的分离与鉴定 5·1 重组DNA技术史上的重大事件 半个世纪以来，分子生物学研究取得了前所未有的进步，主要有3大成就: 第一，解决了遗传的物质基础问题－－基因的分子载体是DNA; 第二，DNA分子的双螺旋结构模型和半保留复制机制，解决了基因的自我复制和世代交替问题; 第三，“中心法则”和操纵子学说，成功地破译了遗传密码，阐明了遗传信息的流动与表达机制。 5·2 DNA基本操作技术 1、基本原理：生物大分子在一定pH条件下，通常会带电荷。将其放置到电场中，就会以一定的速度移向适当的电极。分子在电场作用下的迁移速度，与电场强度和电泳分子所携带的净电荷数成正比，与分子的摩擦系数成反比。摩擦系数是分子大小、极性及介质粘度的函数。根据分子大小、构型或形状的差异和带净电荷数，可通过电泳将蛋白质或核酸分子混合物中的各种成分彼此分离。 5·2 DNA基本操作技术 琼脂糖是一种线性多糖聚合物。将琼脂糖粉末加热到熔点后冷却凝固便会形成良好的电泳介质。经过化学修饰的低熔点琼脂糖，在较低的温度下便会熔化，常用于DNA片段的制备电泳。 5·2 DNA基本操作技术 5.2.2 核酸的分子杂交 将特定的单链DNA或RNA混合在一起，其相应的同源区段（互补）就会退