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基 因 工 程练习教师版
(40分钟 100分)
1.(16分质粒是基因工程中最常用的载体质粒上有标记基因如图所示通过标记基因可推知外源基因插入的位置插入位置不同细菌在培养基上的生长情况也不同。如图表示外源基因的插入位置插入点有、、。
Ⅰ质粒的基本组成单位是 。
将细菌放在含有四环素、氨苄青霉素的培养基中培养属于基因工程操作中的 步骤。
Ⅱ设计实验探究外源基因插入的位置。
步骤
①将导入外源基因的细菌进行培养产生大量细菌。
②分组将细菌平均分成两组并标号为、。
③培养将第组细菌放入 中培养将第组细菌放入 中培养。
④观察并记录结果。
预测实验结果及结论
①若组、组均能正常生长则外源基因插入点是 。
②若组能正常生长组不能生长则外源基因插入点是 。
③若组不能生长组能正常生长则外源基因插入点是 。
分天津高考嗜热土壤芽孢杆菌产生的葡萄糖苷酶是一种耐热纤维素酶为使其在工业生产中更好地应用开展了以下试验
Ⅰ.利用大肠杆菌表达酶
扩增基因时选用 基因组作模板。
下图为质粒限制酶酶切图谱。基因不含图中限制酶识别序列。为使扩增的基因重组进该质粒扩增的基因两端需分别引入 和 不同限制酶的识别序列。
大肠杆菌不能降解纤维素但转入上述构建好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力这是因为? 。
Ⅱ温度对酶活性的影响
据图、可知℃保温分钟后酶会 为高效利用酶降解纤维素反应温度最好控制在 单选。
℃ ℃ ℃ ℃
Ⅲ.利用分子育种技术提高酶的热稳定性
在扩增基因的过程中加入诱变剂可提高基因的突变率。经过筛选可获得能表达出热稳定性高的酶的基因。
与用诱变剂直接处理嗜热土壤芽孢杆菌相比上述育种技术获取热稳定性高的酶基因的效率更高其原因是在过程中 多选。
仅针对基因进行诱变
基因产生了定向突变
基因可快速累积突变
基因突变不会导致酶的氨基酸数目改变
【解题指南】(1)图示信息:Ⅰ.质粒作为载体,应具备的结构有限制酶切割位点、启动子、终止子和标记基因等。Ⅱ.图1表示温度对酶活性的影响,图2表示不同温度下酶的热稳定性的大小。
(2)关键知识:获取目的基因、基因表达载体的构建、酶的活性和热稳定性、诱变育种的原理。
【解析】本题考查基因工程、酶的活性和变异的相关知识。
(1)bglB基因存在于嗜热土壤芽孢杆菌基因组中,故应以该菌的基因组DNA为模板进行PCR扩增。
(2)目的基因与质粒进行重组时,需将目的基因插入启动子和终止子之间,且应靠近启动子和终止子,结合示意图可知,应在扩增的bglB基因两端分别引入NdeⅠ和BamHⅠ两种限制酶的识别序列。
(3)该基因表达载体中含有bglB基因,其可表达产生β-葡萄糖苷酶,可分解纤维素,这样大肠杆菌就获得了分解纤维素的能力。
(4)由图2可知,BglB酶在80℃保温30分钟后,就会失活;由图1可知,当温度为60~70℃时,酶活性较高,而由图2可知,70℃保温30分钟,酶活性会减弱,而60℃保温30分钟后酶活性基本不发生变化,由此可知为高效利用BglB酶降解纤维素,反应温度最好控制在60℃。
(5)在bglB基因扩增过程中加入诱变剂进行诱变处理,相比于诱变剂直接处理嗜热土壤芽孢杆菌,针对性更强;基因突变是不定向的;由于PCR过程中基因扩增即DNA复制快速进行,发生突变后可进行快速累积,进而便于筛选;基因突变可能导致氨基酸数目的改变,如突变后的密码子变为终止密码子,可导致蛋白质合成提前终止,进而导致氨基酸数目变少。
答案:(1)嗜热土壤芽孢杆菌
(2)NdeⅠ BamHⅠ
(3)转基因的大肠杆菌分泌出有活性的BglB酶
(4)失活 B (5)A、C
【易错提醒】限制酶的使用及作用特点的三点提醒
(1)获取目的基因和切割载体时不能选用识别两种序列的限制酶,否则产生的碱基末端不相同。
(2)当限制酶剪切目的基因一次时,获得的黏性末端或平末端有2个,而不是1个,若剪切目的基因两次,共产生4个黏性末端或平末端。
(3)限制酶切割载体的切割位点并不是任意的,必须保证至少有1个标记基因的完整性,以便于检测。
3.(12分海南高考下图是将某细菌的基因导入大肠杆菌内制备“工程菌”的示意图。
据图回答
(1)获得有两条途径一是以的为模板在 酶的催化下合成互补的单链然后在 的作用下合成双链从而获得所需基因二是根据目标蛋白质的 序列推测出相应的序列然后按照碱基互补配对原则推测其的 序列再通过化学方法合成所需基因。
利用技术扩增时需要在反应体系中添加的有机物质有 、 、种脱氧核糖核苷酸和耐热性的聚合酶扩增
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