生化实验好解析.docVIP

实验五、维生素C的定量测定（碘量法） 一、目的：掌握测定维生素C含量的方法 二、原理：利用碘酸钾作氧化剂，即在一定量的盐酸酸性试液中加碘化钾-淀粉指示剂，用已知的浓度的碘酸钾滴定，滴入的碘酸钾释放出游离的碘，此碘液被维生素C还原，直到VC完全氧化后，再滴入碘酸钾（KIO3）时，因无VC的作用，游离的碘可使淀粉指示剂呈蓝色。即为终点。 反应如下： KIO3+5KI+6HCI→6KCI+3H2O+3I2 C6H8O6＋I2 C6H6O6＋2HI 抗坏血酸 脱氢抗坏血酸 三、材料：梨、苹果、桔子 四、试剂、仪器 滴定架+滴定管+沙网 移液管（1ml） 2个 （5ml） 2个 三角瓶 1个 容量瓶（25ml） 1个 吸耳球 1个 研钵 1套 试剂如下： 2%盐酸：取36.6%的盐酸110ml 加入到蒸馏水中，定容至2000ml即公式：36.6%·X 2%·Y，Y设定为1000或2000ml ② 0.5%淀粉液：称取5克可溶性淀粉，先用水将淀粉调至浆状，后加水至1000ml煮沸，或用煮沸的蒸馏水配制。 0.000167 mol/L碘酸钾溶液：精确称取碘酸钾0.3568克，定容至1000ml,得到0.00167mol/L碘酸钾溶液，再稀释10倍，得到0.000167mol/L碘酸钾溶液 ③移入容量瓶中，用2% 盐酸冲洗2～3次，后并入容量瓶中，用2%盐酸定容至25ml,摇匀，放置半小时（暗处） 2、滴定 ①在三角瓶中，用移液管注入 1% KI液 0.5ml 1% KI液 0.5ml 0.5%淀粉液 1 ml 另空白对照试验 0.5%淀粉液 1 ml 样品提取液 5ml （共10ml） 2%盐酸 5ml 蒸馏水 3.5ml 蒸馏水 3.5ml 用0.000167mol/L碘酸钾滴定，要一滴滴加入，并时时摇动三角瓶，至微兰色不褪为终点（1分钟不褪即可），记录所用碘酸钾毫升数。记下所用碘酸钾的毫升数再滴定。 注：①处理所用KIO3的量减去空白所用KIO3的量，即为处理所用KIO3的精确的量。 ②处理试验所呈颜色应与空白试验所呈颜色一致。 五、计算 ××100 注：W—100g 样品中含抗坏血酸的（Vc）量 毫克数 V—滴定样品所用的碘酸钾毫升数 B—滴定时所吸取的样品液毫升数 b—制定样品液的总毫升数（25ml） a—样品的克数 0.088：1ml 0.000167mol/L碘酸钾溶液相当于抗坏血酸的量（mg/ml） 0.088 0.000167×3×176 1分子KIO3，相当于3分子Vc。 Vc分子量176 。 每组：一个材料或同时做两种材料 每组每个材料需做三个重复后取平均值。 一个材料，三个重复，需15ml样品提取液滴定三次，取平均值。 二个材料，六个重复，30ml样品提取液，滴定六次。 空白试验，1个加蒸馏水5ml，滴定一次。 实验六 鸡血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳 一、目的：掌握醋酸纤维薄膜电泳方法 二、原理： 蛋白质是两性电解质。在pH值小于其等电点的溶液中，蛋白质为正离子，在电场中向阴极移动；在pH值大于其等电点的溶液中，蛋白质为负离子，在电场中向阳极移动。血清中含有数种蛋白质，它们所具有的可解离基团不同，在同一pH的溶液中，所带净电荷不同，故可利用电泳法将它们分离。 血清中含有白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等，各种蛋白质由于氨基酸祖坟、立体构象、相对分子质量、等电点及形状不同，在电场中迁移速度不同。由表可知，血清中5种蛋白质的等电点大部分低于pH值7.0，所以在pH8.6的缓冲液中，它们都电离成负离子，在电场中向阳极移动。 蛋白质名称 等电点 相对分子质量 白蛋白 4.88 69000 α1-球蛋白 5.06 200000 α2-球蛋白 5.06 300000 β-球蛋白 5.12 90000~150000 γ-球蛋白 6.85~7.50 156000~300000 在一定范围内，蛋白质的含量与结合的燃染料量成正比，故可将蛋白质区带剪下，分别用0.4mol/L NaOH溶液浸洗下来，进行比色，测定其相对含量。也可以将染色后的薄膜直接用光密度计扫描，测定其相对含量。 肾 病、弥漫性肝损害、肝硬化、原发性肝癌、多发性骨髓瘤、慢性炎症、妊娠等都可以使白蛋白下降。肾病时α1、α2、β球蛋白升高，γ-球蛋白降低。肝硬化时α2、β-球蛋白降低，而α1、γ-球蛋白升高。 三、器材 玻璃板（两块） 竹镊子（一把） 直尺 （一把） 培养皿（一个） 醋酸纤维薄膜 粗滤纸（大小） 常压电泳机 四、试剂： 1、巴比妥缓冲液（PH8.6，离子强度0.07） 巴比妥2.76g 巴比妥钠15.45g，加水至1000ml 2、染色液（可重复使用，回收）： 含氨基黑（10B）0.25g，甲醇50ml，冰