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出口商品中粪链球菌群检验方法 MM_FS_CNJ_0351出口商品 粪链球菌群 多管法 滤膜法 平板计数法 MM_FS_CNJ_0351 出口商品中粪链球菌群检验方法 1.适用范围 本方法适用于食品中粪链球菌群的检验，也适用于羽绒制品填充料中粪链球菌群的检验。 2.主要试剂和仪器 2.1.主要试剂（培养基） 叠氮化钠葡萄糖肉汤[参见附录A（补充件）中A1]； Pfizer肠球菌选择性琼脂（PSE琼脂）[参见附录A（补充件）中A2]； KF链球菌琼脂[参见附录A（补充件）中A3]； 脑心浸液[参见附录A（补充件）中A4]； 脑心浸液琼脂[参见附录A（补充件）中A5]。 2.2.主要仪器 取样工具：镊子、手术剪、刮勺、乳胶手套等； 具盖样品瓶、金属样品桶或其他容器； 高压蒸汽灭菌器； 天平：称量1000g。感量0.01g； 均质器及1000mL具盖均质杯； 移液管：容量1 mL，10mL（大口径）； 培养皿：60mm×15mm，90mm×15mm或50mm×12mm玻璃皿或塑料皿； 各种规格的培养基容器； 玻璃、耐高温塑料、陶瓷或不锈钢过滤器； 滤膜：直径47mm，微孔直径0.45±0.4μm，亦可用性能相同的其他滤膜替代； 振荡器； 恒温培养箱：36±1，44.5±0.5； 恒温水浴箱：44.5±0.5。 3.试样的抽取与制备 3.1.检验批 以不超过2500件（以商品包装件数计，如包、箱、袋等）为一检验批。如另有规定，则按不同商品所规定的报验批为检验批。 同一批商品应具有相同的特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。 3.2.抽样数量 在无特殊规定时，按照公式√—N／2（式中N为该批商品的总件数），遵循四舍五入规则计算抽样件数；如另有规定，则按不同商品所规定的抽样数进行抽样。 3.3.抽样方法与样品保存 按3.2规定的抽样件数随机抽取，以无菌操作逐件开启。 3.3.1.食品：对于有内包装（如袋、瓶或罐装者）的食品，每件至少取一完整未开封的小包装单位作为原始样品；如无内包装或包装较大者，则使用灭菌工具取样。原始样品总量不少于1 kg（1L），装入清洁灭菌容器内，加封后标明标记。如不能及时检验，冷冻食品样品应保持冷冻状态；非冷冻样品需在2～5保存。 3.3.2.羽绒制品填充料：通常情况下是在填充前临时包内取样，必要时从制品中取样。使用灭菌镊子或戴经消毒的乳胶手套从每件的不同部位抽取100g作原始样品，放入灭菌样品桶内，加封后标明标记。如不能及时检验，样品需在2～5保存。 3.4.样品制备 3.4.1.液体食品 用无菌吸管吸取25mL样品，放入装有225mL灭菌生理盐水的500mL稀释瓶中，迅速振摇，充分混匀，制成110样品匀液。 3.4.2.水产品、禽类制品 以无菌操作取25g样品放入装有225mL灭菌生理盐水的均质杯内，以8000r／min均质1～2min，制成110样品匀液。 3.4.3.羽绒制品填充料 取10g样品放入适当大小的锥形烧瓶内，加入400mL无菌水于锥形烧瓶中，用灭菌胶塞塞紧瓶口，置振荡器振荡10min。 对上述各种样品稀释液可根据需要进一步按10倍递增稀释。 4.过程简述 4.1.接种培养和计数 4.1.1.多管法 4.1.1.1.用适当稀释的样液接种一套叠氮化钠葡萄糖肉汤管。接种量为1mL或1mL以下时，使用10mL单料管；接种量为10mL，使用10mL双料管。接种后的试管置35±1培养24±2h，检查各试管的混浊情况。若混浊不明显，继续培养至48±2h后记录结果。 4.1.1.2.培养24±2或48±2h之后，对所有呈现混浊的叠氮化钠葡萄糖肉汤管进行确证试验。用接种环将各管的培养物划线于PSE琼脂平板上，倒置平皿于36±1培养24±2h。琼脂平板上出现的带棕色环的棕黑色菌落，确证为粪链球菌群细菌。 4.1.1.3.MPN值的记录和计算 根据接种的样品量和确证为粪链球菌群细菌的管数，查MPN表[参见附录B（补充件）]，报告每克（毫升）样品中粪链球菌群MPN值。 4.1.2.滤膜法 4.1.2.1.平板培养基制备：倾注或吸取4～5mL融化的KF琼脂于平皿（60mm×15mm）中，若平板表面有气泡，可用火焰灼除。若使用盖合紧密的塑料培养皿（50mm×12mm），可预先制成储备平板，于4～10冰箱内保存4周效果不减。 4.1.2.2.样品量的选择与样品过滤：根据样品的污染程度，使用样液的量为100，10，1，0.1或0.01mL。使用灭菌滤膜过滤样液，以能在滤膜上生长出20～100个菌落为宜。 5.2.3.接种与培养：将已滤过样液的滤膜紧贴在KF琼脂培养基表面上，膜下避免出现气泡。倒置平皿于36±1培养48±2h。 4.1.2.4.粪链球菌群的计数与计算：粪链球菌群细菌在KF琼脂平板上的滤膜上形成暗红色至粉红色菌落