石斛实验方案解读.docVIP

实验方案 一、镇痛实验 （一）、扭体法 1、动物：昆明小鼠，雄性，18-22g 2、实验药物： 旧石斛榨汁（高剂量：2g/kg、低剂量0.5g/kg）、 毛石斛榨汁（高剂量：2g/kg、低剂量0.5g/kg）、 旧石斛水提（高剂量：2g/kg、低剂量0.5g/kg）、 消炎痛（5mg/kg） 3、试剂：生理盐水、0.6%醋酸溶液（新鲜配制） 4、仪器：鼠笼、电子天平、灌胃针及注射器、秒表 5、方法： 1）将96只小鼠随机分为八组：每组12只，分别为：空白对照组，消炎痛组（阳性组），旧石斛榨汁（高低剂量）、毛石斛榨汁（高低剂量）、旧石斛水提（高低剂量）。 2）小鼠按0.1ml/10g给药或蒸馏水，空白对照组以蒸馏水灌胃，消炎痛阳性组以消炎痛溶液灌胃，其余各组分别以同体积高低剂量的石斛提取液灌胃。1次/d，连续5天。 3）最后一次给药，如上。给药后30min，各组小鼠腹腔注射0.6%醋酸液0.2ml/只，记录15min内各组小鼠扭体反应次数。 4）计算药物镇痛百分率,将所得结果进行统计学处理。 药物镇痛百分率=（对照组平均扭体反应次数-给药组平均扭体反应次数）/对照组平均扭体反应次数×100% 6、注意事项： 1）醋酸有挥发性,宜用前新鲜配制,浓度为0.6-0.9%均可,实验前须作预实验 2）每只动物腹腔注射部位和操作技术力求一致. （二）、热板法 1、动物：昆明小鼠，雌性，18-22g 2、实验药物： 旧石斛榨汁（高剂量：2g/kg、低剂量0.5g/kg）、 毛石斛榨汁（高剂量：2g/kg、低剂量0.5g/kg）、 旧石斛水提（高剂量：2g/kg、低剂量0.5g/kg）、 消炎痛（5mg/kg） 3、试剂：生理盐水、0.6%醋酸溶液（新鲜配制） 4、仪器：热板测痛仪、电子天平、灌胃针及注射器、秒表 5、方法： 1）将96只小鼠随机分为八组：每组12只，分别为：空白对照组，消炎痛组（阳性组），旧石斛榨汁（高低剂量）、毛石斛榨汁（高低剂量）、旧石斛水提（高低剂量）。 2）小鼠按0.1ml/10g给药或蒸馏水，空白对照组以蒸馏水灌胃，消炎痛阳性组以消炎痛溶液灌胃，其余各组分别以同体积高低剂量的石斛提取液灌胃。1次/d，连续5天。 3）筛选小鼠。接通电源，温度控制在55℃。将小鼠放于55℃的恒温热板上，记录小鼠痛阈值（疼痛反应发生的时间），测定2次痛阈值，以5-30d内不出现疼痛反应（舔足）者弃之不用。 4）最后一次给药，如上。给药后30min，将各组小鼠置于55℃恒温热板上，立即开始计时，以小鼠疼痛发生为痛阈潜伏期 5）计算痛阈提高百分率，将所得结果进行统计学处理。 痛阈提高百分率=（用药后痛阈值-用药前平均痛阈值）/用药前痛阈值×100% 6、注意事项： 1）小鼠个体差异较大,宜选用痛阈值在5-30s内者为合格,不合格者弃之不用。小鼠不能连续进行测定。 2）室温对本实验有一定影响，15-20℃为宜，过低小鼠反应迟钝，过高小鼠易于敏感易引起跳跃，影响结果准确性。 3）正常小鼠放入热板后易出现不安、举前肢、舔前足、踢后肢等现象，这些动作不能作为疼痛指标，只有舔后足才作为疼痛指标。 二、镇静实验 （一）、对小鼠自主活动的影响 1、动物：昆明小鼠，雌雄各半，18-22g（小鼠曾做镇痛实验，自然饲养两日） 各组的扭体（雄性）1-6号+热板（雌性）7-12号小鼠 2、实验药物： 旧石斛榨汁（高剂量：2g/kg、低剂量0.5g/kg）、 毛石斛榨汁（高剂量：2g/kg、低剂量0.5g/kg）、 旧石斛水提（高剂量：2g/kg、低剂量0.5g/kg）、 戊巴比妥（5mg/kg） 3、试剂：生理盐水 4、仪器：XZC-4型小动物自主活动测定仪、电子天平、灌胃针及注射器 5、方法： 1）将96只小鼠随机分为八组：每组12只，分别为：空白对照组，戊巴比妥组（阳性组），旧石斛榨汁（高低剂量）、毛石斛榨汁（高低剂量）、旧石斛水提（高低剂量）。 2）小鼠按0.1ml/10g给药或蒸馏水，空白对照组以蒸馏水灌胃，戊巴比妥阳性组以戊巴比妥溶液灌胃，其余各组分别以同体积高低剂量的石斛提取液灌胃。1次/d，连续3天。 3）实验前小鼠禁食不禁水12h，最后一次给药，如上，安定组以安定溶液灌胃，给药后30分钟，将各组小鼠置于小鼠自主活动测定仪内（除可待因组），适应3分钟后测定5分钟内小鼠活动次数（包括活动次数与站立次数）。 5）将结果进行统计学处理 6、注意事项： ①小鼠自主活动前禁食12h，使其增加觅食活动； ②小鼠放入自主活动仪中有一个适应过程，各组间实验条件应力求一致，实验进行时尽量保持安静，避免影响小鼠活动。 (二)、对小鼠睡眠时间的影响 1、动物：昆明小鼠，雄性，25g（小鼠曾做镇痛实验，自然饲养4日） 2、实验药物： 旧石