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名词解释 1.基因工程：是将目的基因或DNA片段与合适的载体连接转入目标生物细胞，通过复制、转录、翻译外源目的基因以及蛋白质的活性表达，使转基因生物获得新的遗传性状的操作。 2.限制性内切核酸酶：能够识别双链DNA分子中的某一段特定核苷酸序列，并在此切割DNA双链的内切核酸酶。 3.同切点酶：又称同裂酶，是一类来源于不同微生物、能识别相同DNA序列的限制性内切核酸酶。 4.同尾酶：是一类限制性内切核酸酶，它们来源各异，识别的靶序列也各不相同，但切割后 能产生相同的黏性末端。 5.酶的星号活性（Star activity）：高浓度的酶、高浓度的甘油、低离子强度、极端pH值等，会使一些核酸内切酶的识别和切割序列发生低特异性，即所谓的酶的星号活性现象。 6.DNA连接酶：是能催化双链DNA片段靠在一起的3’羟基末端与5’端磷酸基团末端之间通过形成磷酸二酯键，使两末端连接的一种核酸酶。 7.载体：在基因克隆中能携带外源基因进入受体细胞复制、整合或表达的工具称为载体。 8.多克隆位点：是包含个限制性酶切点的一段很短的DNA序列 (互补：为质粒DNA编码β—半乳糖苷酶的(亚基，宿主细胞可编码β亚基虽然宿主和质粒编码的片段各自都没有酶活性，但它们可以融为一体，形成具有酶学活性的蛋白质，这种互补现象叫(互补。 10.黏粒载体（考斯质粒载体）：是一类人工构建的含有λ-DNAcos序列和质粒复制子的特殊类型的载体。 11.质粒：是生物细胞内固有的、能独立于寄主染色体而自主复制、并被稳定遗传的一类核酸分子 12.探针：当用一个标记的核酸分子与核酸样品杂交,便可查明该样品中是否存在与该标记核酸分子具有同源性的核酸分子。这个标记的核酸分子称为探针(probe)，可以是DNA，也可以是RNA，或合成的寡核苷酸. 13、SD序列：是存在于原核生物起始密码子上游7-12个核苷酸内的一种4-7个核苷酸的保守片段，它与16SrRNA3’端反向互补，所以可将mRNA的AUG起始密码子置于核糖体的适当位置以便起始翻译作用。 14、包含体：目的蛋白子啊细胞质的还原性环境中，以不溶性的形式产生并聚集形成蛋白质聚合物即为包含体。 简答： 1. 影响限制性核酸内切酶活性的因素 答：1）DNA的纯度 2）DNA的甲基化程度 3）消化反应的缓冲液系统 4）DNA的分子结构 5）酶的纯度 6）酶切反应的温度 7）酶的星号活性 2.大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ与klenow片段的比较 答：1）结构上的区别：Klenow片段是完整DNA聚合酶Ⅰ的一个片段，是用枯草杆菌蛋白酶处理大肠杆菌DNA聚合酶时，得到的两个片段中分子量较大的一个具有5→3聚合酶活性→5的外切酶活性，不含5→3外切酶活性。 2）功能上的区别：DNA聚合酶I可通过DNA缺口平移的方法制备DNA探针。而klenow酶主要用于缺口平移标记DNA，也用于DNA的缺口补平和延伸。还在cDNA克隆中用于第二条cDNA链的合成。 2）能在宿主细胞中自主复制，并实现外源基因的增殖； 3）.具有多种单一的限制性核酸内切酶识别切割位点； 4）.具有较高的外源DNA的载装能力； 5）.具有合适的筛选标记。 4.质粒的基本性质 答：（1）自主复制。质粒DNA上都含有一个复制起始区，控制着质粒在宿主细胞内的复制，这一复制起始区称为“复制子”。一般一个质粒DNA分子上只含有一个复制子。按复制能力可将质粒分为严紧型和松弛型两类。 （2）不相容性：在没有选择压力的情况下，两种亲缘关系密切的不同质粒，不能够在同一寄主细胞系中稳定地共存的现象，又称为不亲和性。这样的两种质粒称为不亲和质粒。 （3）转移性：能在自然条件下自发地从一个细胞转移到另一个细胞（接合作用）的质粒称为接合型质粒；不能在自然条件下独立地发生接合作用的质粒称为非接合型质粒。 （4）编码性状：野生型的质粒DNA上往往携带一个或多个遗传标记基因，这使得寄主生物产生正常生长非必需的附加性状。 5、Southern杂交（DNA）步骤: 答：①DNA的片段化及其电泳分离； ②凝胶电泳后的变性处理； ③转移并固定到滤膜上； ④杂交； ⑤检测与分析 6、基因组文库与cDNA文库的区别 基因组文库：基因组文库简称基因文库，是将某一生物基因组DNA片段化并全部克隆后获得的重组子群体的总称。 CDNA文库：是将生物特定的组织器官或特定发育时期的全部mRNA反转录成cDNA，并全部克隆成重组子，在该重组子群集中包含了全部表达基因的转录本。 区别：基因组文库包含全部基因，但cDNA文库石油mRNA反转录得到的，，已经去掉基因中的内含子部分 7.比较克隆载体与表达载体的异同 同：1）.具有针对受体细胞的亲缘性或亲和性(可转移性)，可以携带外源基因进入受体细胞； 2）能在宿主细胞中自主复制，并实现外源基因的增殖；