天然产物分析实验报告解析.docVIP

天然产物活性成分 检测实验报告 姓名：李雪怡 学号：2012332870009 年级班级：12生物制药（1）班 实验一：茶叶中茶多酚的粗提取与含量测定 一、实验目的： 1、了解并熟悉茶多酚的元素组成、结构构成、理化性质。 2、掌握溶剂萃取法粗提取茶多酚的原理与操作。 3、掌握酒石酸铁比色法测定茶多酚的含量的原理及操作。 4、了解分光光度计的使用方法和注意事项。 二、实验原理和应用： 茶多酚（Tea Polyphenols）是茶叶中多酚类物质的总称，包括黄烷醇类、花色苷类、黄酮类、黄酮醇类和酚酸类等。其中以黄烷醇类物质（儿茶素）最为重要。 茶多酚又称茶鞣或茶单宁，是形成茶叶色香味的主要成份之一，也是茶叶中有保健功能的主要成份之一。研究表明，茶多酚等活性物质具解毒和抗辐射作用，能有效地阻止放射性物质侵入骨髓，并可使锶90和钴60迅速排出体外，被健康及医学界誉为“辐射克星”。 目前国内外茶多酚粗品的提取的方法主要有：溶剂萃取法、离子沉淀法、树脂吸附分离法、超临界流体萃取法、超声波浸提方法、微波浸提法等等。在这些提取茶多酚的方法中 ，每种方法都有它各自的针对性和使用范围 ，使用时要根据各自的情况而定。根据实验室的条件及实验要求，本实验采用溶剂萃取法对干茶叶中的茶多酚进行粗提取，即利用茶多酚易溶于乙酸乙酯等有机溶剂的原理进行液-液萃取。 茶多酚的测定方法有高锰酸钾直接滴定法和酒石酸铁比色法，由于高锰酸钾直接滴定法操作比较复杂，且靠肉眼观察颜色判断终点，如果样品溶液颜色较深时，可能影响测定结果。本实验将应用酒石酸铁比色法测定茶多酚的含量。酒石酸铁能与茶多酚生成紫褐色络合物，络合物溶液颜色的深浅与茶多酚的含量成正比。因此可以用比色方法测定。该法可避免高锰酸钾滴定法所产生的人为视觉误差。 三、实验仪器、材料和试剂 实验仪器： 分光光度计、干燥箱、电子天平 、pH计、真空泵、纱布、漏斗、旋转蒸发仪、250ml 容量瓶、50ml 容量瓶、分液漏斗 实验材料： 干茶叶（市售散装茶即可） 实验试剂： 硫酸亚铁 (FeSO4·7H2O) ，酒石酸钾钠 (KNaC4H4O6·4H2O) ，磷酸氢二钠 (Na2HPO4·12H2O) ，磷酸二氢钠 (NaH2PO4·2H2O) ，乙酸乙酯。 四、实验操作 1、溶液的配制 酒石酸亚铁溶液制备：称取0.25 g （准确至0.0001）硫酸亚铁，1.25 g酒石酸钾钠（准确至0.0001），用水溶解并定容至250 ml（低温保存，有效期10天）。 2、干茶叶的预处理 将干茶叶洗净、晾干，烘干，最后粉碎。粉碎的目的是与液体的接触面增大使提取率增高。由于试验条件的限制，用剪刀代替粉碎机将干茶叶剪碎，并且用研钵研细，干茶叶量为50. 00g。 3、茶多酚的粗提取与定性检测 称取经过预处理的干茶叶末30. 00g，加入250mL 90℃接近沸水中搅拌浸提、过滤，先后用 250mL的乙酸乙酯萃取两次。合并两次有机相。减压蒸馏除去乙酸乙酯溶剂得黄色粉末状茶多酚。从外观上看，为黄色粉末状。物理性能为，易溶于水及乙醇，味苦涩。 图 1 高浓度茶多酚样品（98%） 4、茶多酚溶液的配置与含量的测定 称取步骤3中提取的茶多酚粉末0.2500g，加水溶解定容至 250mL，混匀 ，即为每毫升含 1mg步骤3中提取的茶多酚粉末的溶液。 分别取茶多酚溶液1. 0mL、2. 0mL、3. 0mL、4. 0mL于 4个 50mL容量瓶中，各加水至10mL，再加酒石酸亚铁溶液 10mL，加入 pH为 7. 5的磷酸缓冲液至刻度，混匀后用1cm比色皿，以空白试剂作参比，于波长 540nm处测定吸光度 A，计算实验数据，并绘制实验数据表格。 ω—茶多酚的含量(%)，A—样品溶液的吸光度值，T—样品溶液的总体积（mL） V—测定用样品溶液的量(mL)，m—样品质量（g) 3.913—用1cm比色杯，当吸光度为1.0时，试液中茶多酚的浓度为3.913(mg/mL) 表 1 实验次数 A T (mL) V (mL) m (g) ω（%） ω（mg/g) 1 0.104 250 1 0.2500 40.70 26.61 2 0.223 250 2 0.2500 43.63 38.54 3 0.362 250 3 0.2500 47.22 47.22 4 0.463 250 4 0.2500 45.29 45.29 5、实验结果检验——绘制茶多酚标准曲线 根据步骤4中所得的实验数据，绘制茶多酚标准曲线，斜率R处于0.95-1.05之间方可达到实验要求。 表 2 绘制标准曲线所需数据 V(mL) 1.0 2.0 3.0