蛋白翻译后修饰教案分析.pptVIP

2.5 磷酸化 细胞信号转导过程：一些激素或细胞因子与细胞膜受体或细胞内受体结合并被激酶激活, 激素或信号因子随着激酶的磷酸化也被磷酸化, 引起细胞内的信号效应。 癌症研究中：微管蛋白的磷酸化可能导致癌症的发生. 细胞中使用“最后检验点策略”(LCP)控制细胞凋亡, 即将含有硝基化酪氨酸的 α -微管蛋白组装到微管上, 这将导致微管功能失常而最终导致细胞凋亡. 但如果微管蛋白酪氨酸连接酶(TTL)被磷酸化, 将可能使细胞“躲过”LCP 控制的细胞凋亡,从而最终发展成为癌细胞 . 2.5 磷酸化 DNA新陈代谢的研究中：细胞中DNA损伤可导致人的复制蛋白 A(RPA)32 kD 亚基 N 端的过度磷酸化, 这有助于调控 DNA 的新陈代谢, 促进DNA 修复. 有数据显示, 过度磷酸化会导致 RPA 构象改变, 降低 DNA 复制的活性, 但不会影响 DNA 的修复。 2.6 SUMO 化 SUMO为小泛素相关修饰物(small ubiquitin- related mod-ifier，SUMO)分子，是一种近年发现的泛素样分子，也参与蛋白质翻译后修饰，但是不介导靶蛋白的蛋白酶体降解， 而是可逆性修饰靶蛋白，参与靶蛋白的定位及功能调节过程。 3 研究方法及关键技术 3.1 甲基化研究方法及关键技术 甲基化特异性的 PCR：其基本原理是把所有的基因组 DNA 用亚硫酸氢盐进行处理，如此做是因为尚未发生甲基化修饰的胞嘧啶都会被作:用变为尿嘧啶，但进行甲基化修饰的胞嘧啶则不会发生改变。由上面的原理可知，采用不同种类的引物做 PCR，即可检测出这种微弱的变化， 这样就能确定基因是否存在甲基化。 亚硫酸氢盐测序法：利用重亚硫酸盐对 DNA 进行处理， 此过程会使没有进行甲基化的胞嘧啶变为尿嘧啶，但进行甲基化的基团则不会。然后把经作用的物质为基础，加入甲基化特异性的物质(primerI)或者非甲基化的物质(primerII)，使其进行特异性的扩增。 高分辨率熔解曲线法 “ ” 2016 “ ” * 蛋白翻译后修饰 1 定义 翻译后修饰（英语：Post-translational modification，缩写PTM；又称后转译修饰）是指蛋白质在翻译后的化学修饰。对于大部份的蛋白质来说，这是蛋白质生物合成的较后步骤。 2 蛋白质翻译后修饰的类型 蛋白质翻译后修饰是一个复杂的过程，目前在真核生物中20 种以上的修饰类型，比较常见的为甲基化、乙酰化、糖基化、泛素化、磷酸化以及近年发现的SUMO化。 2.1 甲基化 蛋白质的甲基化修饰是在甲基转移酶催化下, 在赖氨酸或精氨酸侧链氨基上进行的甲基化。是指从活性甲基化合物( 如S － 腺苷基甲硫氨酸)上将甲基催化转移到其他化合物的过程。可形成各种甲基化合物，或是对某些蛋白质或核酸等进行化学修饰形成甲基化产物。 组蛋白甲基化 是发生在组蛋白合成之后,以硫代腺苷甲硫氨酸（SAM）为甲基供体,在组蛋白甲基转移酶的(histone methyltransferase,HMTases)的催化下,将基转移到蛋白质的Lys或Arg残基上。 组蛋白甲基化 组蛋白赖氨酸甲基化. 组蛋白精氨酸甲基化 组蛋白甲基化 1.组蛋白赖氨酸甲基化 组蛋白赖氨酸甲基化发生在H3-K4,H3-K9,H3-K27,H3-K36,H3-K79和H4-K20上,还可发生于H1 N端。H3-K9,H3-K27,H4-K20的甲基化与染色体的钝化过程有关,而H4-K9的甲基化可能与大范围的染色质水平的抑制有关。H3-K4,H3-K36,H3-K79位的甲基化与染色体转录激活过程有关,其中H3-K4的单甲基化修饰可以对抗H4-K9甲基化所导致的基因抑制。 组蛋白的甲基化 2.组蛋白的精氨酸甲基化 组蛋白精氨酸甲基化位点为H3-R2,H3-R8,H3R17,H3-R26,H4-R4它们都可以增强转录。 2.2 乙酰化 乙酰化其主要讲把一种乙酰官能基团添加到另一种有机化合物上,并进行结合的过程。乙酰化也是细胞内蛋白质翻译后修饰的一种重要形式。组蛋白等许多蛋白都可以发生乙酰化。 2.2 乙酰化 乙酰化修饰过程主要发生在组蛋白上，是由组蛋白乙酰转移酶( HATs) 催化的，其反过程去乙酰化由组蛋白去乙酰酶( histone deacetylases，HDs 或者HDACs) 催化的。核心组蛋白的N-末端富含赖氨酸，生理条件下带正电，可与带负电的DNA 或相邻的核小体发生作用，导致核小体构象紧凑及染色质高度折叠。乙酰化使组蛋白与DNA 间的作用减弱，导致染色质构象松散，这种构象有利于转录调节因子的接近，从而可以和转录因子结合，促进基因的转录; 去乙酰化则抑制基因转录。 蛋白质乙酰化示意图 2.3 糖基化 蛋