用于荧光酶标仪检测H9c2心肌细胞摄取2-NBDG - 第三军医大学学报.docVIP

2-NBDG用于H9c2心肌细胞葡萄糖摄取的研究 叶 林，陆凯，张冬颖，覃数 重庆医科大学附属第一医院心血管内科，400016 作者姓名、单位、科室、职称、通讯地址、邮政编码、联系电话、E-mail 第一作者简介：叶林，女，硕士研究生，单位：重庆医科大学附属第一医院；科室：心血管内科；地址：重庆市渝中区袁家岗友谊路1号重医附属一院心内科；邮编：400016；电话Email：yelin60@ 张冬颖，博士，副教授 单位：重庆医科大学附属第一医院；科室：心血管内科；地址：重庆市渝中区袁家岗友谊路1号重医附属一院心内科；邮编：400016；电话Email：zdy.chris@； 通讯作者简介：覃数，博士，教授，博士生导师，单位：重庆医科大学附属第一医院；科室：心血管内科；地址：重庆市渝中区袁家岗友谊路1号重医附属一院心内科；邮编：400016；电话Email：Qinshu@21 [摘 要] 目的：评估荧光标记2-脱氧葡萄糖(2-deoxyglucose，2-DG) 即2-NBDG (2-[N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diaxol-4-yl)amino]-2-deoxyglucose，2-NBDG)，作为光学探针检测H9c2心肌细胞葡萄糖摄取的能力。 方法：间接免疫荧光法测定H9c2心肌细胞葡萄糖转运体 (GLUT-1、GLUT-4)的表达。用不同浓度2-NBDG和不同孵育时间处理H9c2心肌细胞，探讨其量效-时效关系，荧光酶标仪测定2-NBDG孵育H9c2细胞的最适浓度和时间。以2-NBDG最适浓度孵育H9c2心肌细胞，同时用共聚焦显微镜和流式细胞仪检测细胞荧光强度差异，观察心肌细胞摄取2-NBDG情况。使用竞争性抑制剂D型葡萄糖(D-Glu)与2-NBDG共同孵育H9c2心肌细胞，观察D-Glu对2-NBDG的竞争性抑制情况。 结果：间接免疫荧光法显示H9c2心肌细胞高表达GLUT-1、GLUT-4。2-NBDG孵育H9c2心肌细胞的最适浓度和时间分别为100 μmol/L和30min。共聚焦成像和流式细胞仪均显示H9c2心肌细胞能有效摄取2-NBDG加入D-Glu后荧光信号强度分别降低27%和46.7%。H9c2心肌细胞葡萄糖摄取结论：2-NBDG能迅速被高表达GLUT-1、GLUT-4的H9c2心肌细胞摄取并滞留于细胞内，且可以被D-Glu竞争性抑制，表明2-NBDG 可检测细胞葡萄糖摄取的。 [关键词] 2-NBDG；H9c2心肌细胞；葡萄糖摄取 The Study on 2-[N-( 7-nitrobenz-2-oxa-1，3-diazol-4-yl) amino]- 2-deoxyglucose Used for Glucose Uptake in H9c2 Cells YE Lin，LU Kai，ZHANG Dongying，QIN Shu Department of Cardiology，The First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University，Chongqing 400016，China [Abstract] Objective: To assess the possibility of a deoxyglucose analog (2-NBDG) as a fluorescence probe to detect the glucose uptake in H9c2 cells. Methods: Glucose transporter 1 (GLUT1) and Glucose transporter 4 (GLUT 4) proteins in H9c2 cells were identified by indirect?immunofluorescence (IIF) assays. H9c2 cells were incubated with 2-NBDG at a cohort concentration for different periods and the most suitable concentration and exposure period were determined by fluorescence?microplate reader. H9c2 cells were incubated with 100 μmol/L 2-NBDG for 30min with or without D-Glu, a potent competitive inhibitor of 2-NBDG. After the incubat