第二章 基因工程与食品产业 转基因食品与安全课件.ppt

二、目的基因与载体的连接 　　用与提取目的基因相同的限制酶切割质粒使之出现一个切口，将目的基因插入切口处，让目的基因的黏性末端与切口上的黏性末端互补配对后，在连拉酶的作用下连接形成重组DNA分子。 三、重组DNA向受体的转化 　　要让目的基因表达，必须将它导入受体细胞并进行扩增。　　为获得目的基因的表达产物时，通常以大肠杆菌等无害易得的细菌为受体。为改进某种生物时，将欲改进的生物细胞为受体。 导入 扩增 重组DNA向受体细胞的导入方法有： 转化：将重组质粒导入受体细胞，使受体菌的遗传性状发生改变。 转染：用携带外源基因的病毒感染受体细胞的方法。 电转化法：（电穿孔法）对受体细胞进行短暂、高压的电泳脉冲，质膜形成nm微孔，DNA能直接通过孔，或作为孔闭合时膜组分重新分布而进入细胞质中。 重组质粒 转化法 感受态的出现 转化因子的吸附和渗入 转化因子的整合 1）重组DNA向受体的转化 （1）感受态的出现 感受态：指受体细胞最易接受外源DNA片段并实现其转化的一种生理状态。 细菌的感受态只出现在特定的生长条件和生长阶段。 采用人工的方法诱导产生感受态：把供试的细菌由丰富的培养液转到贫乏的培养液中；利用Ca2+；改变温度等方法。 （2）转化因子的吸附和渗入 转化因子：是离体的DNA片断。 过程：双链DNA片段与感受态受体菌细胞表面的DNA结合位点结合；在吸附位点上的DNA被核酸内切酶分解