Chapter3RNAprocessing(C).ppt

* 5’帽：翻译起始信号的一部分；安全帽 * 所有真核生物mRNA都有零号帽子 多数真核生物1号帽子都是2‘-OH甲基化；如果mRNA的第二位是A，其N6位有时也甲基化，不过这一反应只能在2’-OH甲基化后才能发生 有2号帽子的mRNA只占有帽mRNA总量的10%~15%以下 * * 若是先有核酸，谁来催化其合成；若是先有蛋白质，他们合成的模板是什么 * 内含子如果其中发生部分丢失，不一定会对剪接产生影响。 5’、 3’末端或分支部位发生变异，则会导致错误的剪接。 分支点共同序列中A为100%保守，在3’ 剪切位点上游18-40 bp处 * 在3’ 剪接点的上游20～50nt * 在剪接体作用下内含子形成套索结构，两个外显子的3’端和5’端接近并连接起来 * 分支部位中A的2’-OH攻击内含子5’末端与外显子1连接的磷酸二酯键，剪下了外显子1，而A原来已有以3’、5’磷酸二酯键相连的两个相邻的核苷酸残基，加上此 2’、5’磷酸二酯键的连接后，形成了“套索”中间产物。 2、已被剪切下的外显子1的3’末端-OH攻击内含子3’末 端与外显子2之间的3’、5’磷酸二酯键，链断裂，内含 子以套索形式被剪切下来，同时外显子1与外显子2连 接起来。前mRNA的内含子的剪接通过两次转酯反应进行，为半自主催化 * 原生动物 rRNA，真菌/酵母线粒体基因的内含子属于I 型内含子 * 核酶催化内含子的剪接反应涉及到转酯反应(transesterification)：酯键从一个位置转移到另一个位置 * II 型内含子分布在酵母和玉米线粒体RNA，细胞色素氧化酶的a亚基、b亚基， * * RNA的编辑（RNA editing）现象并不普遍 使遗传信息在RNA水平发生变化 * 碱基转换 （哺乳类, 载脂蛋白apo-B; 脑谷氨酰胺受体Glu/Arg） 人体中的载脂蛋白B： 在肝细胞中未编辑的RNA产生载脂蛋白B100（4563个残基，512kDa）。 在肠细胞中，在6666位点（全长14500nt），通过编辑一个C变为U，产生一个终止密码，最终产生截短的载脂蛋白B48（2153个残基，250kDa）。 * （原生动物, 锥虫） * 尿苷残基由UTP提供 4.意义： ① 突破了酶的概念； ② 揭示了内含子自我剪接的奥秘； 促进了RNA的研究 ③ 为生命的起源和分子进化提供了新的依据。 二、前mRNA的剪接（splicing） （一）前mRNA的内含子　 GU-AG类（主要） AU-AC类（次要） 　 G100U100A62A68G84T63 12Py N C65A100G100 A64G73 N 内含子 外显子 外显子 左位点(5’/ 供体) 右位点(3’/ 受体) 分支点共同序列 Py80 N Py80 Py87 Pu75 A Py95 GU-AG类内含子剪接位点的特征： （1）5’剪切点（供体位点）为GU （2）3’剪切点（受体位点）为AG GT-AG rule (GT-AG 规则)：指在核基因内含子开始和结束出现的两个固定的脱氧核苷酸:5＇端为GT, 3＇端为 AG，与前体RNA内含子剪接有关 （3）分支部位： 多聚嘧啶序列：Py80 N Py80 Py87 Pu75 A Py95， （ 二）剪接体的形成 1.剪接体（spliceosome） 是由几种非特异的小核糖核蛋白(UsnRNP)与mRNA前体结合而成 2.剪接因子 （1）UsnRNPs ：U1、U2、U5、U4/U6 （2）化学组成：U-RNA+proteins U-RNAs(uracil rich RNA)： snRNAs （3）特点：snRNP中的RNA成分与5’端和3’端剪接点及分支点的多种保守碱基配对 U1 U1 U2 U4/6 U5 U1 U2 U4/6 U5 U1 U2 OH OH UACUAAC GU AG OH UACUAAC UG AG 3、剪接体的形成 3、剪接体的形成： （1）U1snRNP识别外显子的5′末端剪接序 列，并与其互补而结合 （2）U2snRNP识别并结合于分支部位 （3）U5snRNP，识别并结合于内含子3′末端剪接位点 （4）U4，U6也参加到剪接体中，起配合作用 （5）mRNA与snRNP形成复合体---剪接体 GU AG A U G AG A GU AG A 套索结构 套索的形成及剪接 1 2 1 2 （三）前mRNA的内含子的剪接　　 1、分支点A的2