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* * * 见书162页 * * * 2. 涂布试验 3. 平板影印培养试验 1952年，J. Lederberg夫妇的论文《平板影印培养法和细菌突变株的间接选择》，更好地证明了微生物的抗药性是在未接触药物前自发地产生的，这一突变与相应药物环境毫不相干。 平板影印培养法，是一种能达到在一系列培养皿的相同位置上出现相同遗传型菌落的接种培养方法。 平板影印试验的原理 未接触过任何一点链霉素的情况下，就可以筛选到大量抗链霉素的突变株 平板影印培养法 用物理或化学的诱变剂使诱变对象内的遗传物质（DNA）的分子结构发生改变，引起性状变异并通过筛选获得符合要求的变异菌株的一种育种方法。 （三）诱变育种 1.诱变育种的基本过程 2.变异菌的一般筛选方法 选择选择合适的出发菌株 ↓ 制备待处理的菌悬液 ↓ 诱变处理 ↓ 筛选 ↓ 保藏和扩大试验 1.诱变育种的基本过程： 2.1 条件抗性突变型的筛选 2.2 抗生素抗性变异株的筛选 方法：梯度平板法（gradient plate） 2.3 抗药性突变株的筛选 第四节 菌种的衰退、复壮及保藏 （一） 如何防止菌种的衰退 （二） 保藏菌种的方法 衰退：菌种在培养或保藏过程中，由于自发突变的存在，出现某些原有 优良生产性状的劣化、遗传标记的丢失等现象，称为菌种的衰退。 常见的衰退现象： ☆菌落和细胞形态的改变； ☆生长速度缓慢，产孢子越来越少； ☆抵抗力、抗不良环境能力减弱等; ☆代谢产物生产能力或其对宿主寄生能力下降。 菌种的复壮：使衰退的菌种恢复原来优良性状。 你认为采取哪些措施能促进菌种的复壮？ 1.控制传代次数； 2.选择合适的培养条件；  3.采用不同类型的细胞进行传代； 4.采用有效的菌种保藏方法。 （一） 防止菌种衰退的方法 （二）常用的保藏菌种方法 ① 低温保藏法 方法：菌种管置4℃冰箱保藏，定时传代  原理：低温下，微生物代谢强度明显下降 ② 石蜡油低温保藏法 橡皮塞取代棉塞、加石蜡油。③ 干燥保藏法 将菌种置于土壤、细纱、滤纸、硅胶等干燥材料上保藏。如砂土管法，适用于放线菌、芽孢菌和某些真菌保藏，保藏时间几年至几十年。 ④真空冷冻干燥法 加有保护剂的菌悬液在冻结状态下予以真空干燥。 适用于各种微生物，便于大量保藏，菌种存活时间长，是目前最好的保藏方法。 ⑤液氮超低温保藏法 将菌种置于保护剂中，液氮(-196℃)预冻后,保存在超低温冰箱中。 适用于各种微生物的较理想的保藏方法。 方法名称 主要措施 适宜菌种 保藏期 评价 冰箱保藏法（斜面） 冰箱保藏法（半固体） 石蜡油封藏法* 沙土保藏法 冷冻干燥法 低温 低温 低温、缺氧 干燥、无营养 干燥、无氧、低温、有保护剂 各大类 细菌、酵母菌 各大类** 产孢子微生物 各大类 3~6月 6~12月 1~2年 1~10年 5~15年以上 简便 简便 简便 简便有效 简便有效 几种常用菌种保藏方法的比较 国内外菌种保藏机构 菌种保藏机构的任务：广泛收集科研和生产菌种、菌株，并加以妥善保管，使之达到不死、不衰、不乱以及便于研究、交换和使用的目的。 菌种保藏机构： 中国微生物菌种保藏委员会(CCCCM) 普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC) 美国的典型菌种保藏中心(ATCC) 英国国家典型菌种保藏所（NCTC） 法国里昂巴斯德研究所（IPL） (1) Transformation, which involves donor DNA free in the environment (2) Transduction, in which the donor DNA transfer is mediated by a virus (3) Conjugation, in which the transfer involves cell-to-cell contact and a conjugative plasmid in the donor cell Three main processes of genetic recombination in prokaryotes fragments of homologous DNA from a donor chromosome are transferred to a recipient cell Conjugation Transformation Tra