长角血蜱孤雌种群防御素基因原核表达研究.docVIP

第一章 文献综述 1．1 引言 蜱（tick）为专性吸血的体外寄生动物，依据新的分类体系（Barker and Murrell, 2004），蜱被划分于节肢动物门（Arthropoda），蛛形纲（Arachnida），蜱螨亚纲（Acari），寄螨总目（Parasitiformes），蜱目（Ixodida）。作为具有特殊吸血特性的类群，蜱不仅繁殖力超强，而且宿主甚为广泛。由于蜱在生活史中经常需要更换宿主，且能够在吸血过程中传播多种病原体（病毒、立克次体、原虫、细菌、毒素等），可引起莱姆病、森林脑炎、Q热、斑点热、人粒细胞无形体病以及蜱瘫等各类疾病（Jongejan and Uilenberg, 2004; 陈泽等, 2011），给人类健康和畜牧业生产带来极大的危害。近年来的一些研究报道发现，蜱可采用各种抗菌肽作为有效的武器来抵御各类病原体。蜱体内的一些生物分子（抗菌肽、抗凝血分子、免疫调节肽、抗病毒肽、抗肿瘤肽等）又具有极其重要的研究及临床应用价值（潘卫庆, 2007）。 1．2 孤雌生殖种群简介 长角血蜱隶属硬蜱科血蜱属（邓国藩, 1993），在自然界存在两种生殖种群，两性生殖种群与孤雌生殖种群。长角血蜱在全世界范围内都有分布，其中两性生殖种群大多分布于澳大利亚和东亚地区，在南太平洋的一些岛屿上及新西兰、俄罗斯等地均有发现（张舒林和姜在阶, 1997）。我国也已经在17个省市发现该蜱两性种群（颜忠诚和李春林, 2000）。孤雌生殖种群相对较少，在日本北部、新西兰、前苏联的远东地区曾有发现，我国在上海、四川、甘肃等地也均有发现（Hoogstraal et al., 1968）。因其分布很广泛，且其宿主多以哺乳类为主，尤其家畜类（牛、羊、马、犬等）及多种野生动物（Hoogstraal et al., 1968; 颜忠诚和李春林, 2000; 张舒林和姜在阶, 1997），可携带泰勒虫（Theileria）、巴贝斯原虫（Babesia）、螺旋体（spirochete）等病原体（白启等, 1996 ; Jongejan and Uilenberg, 2004; Guan et al., 2010; Li et al., 2009），给畜牧业的发展及人类健康造成了极大损害。 长角血蜱孤雌生殖种群在形态学、生活习性等方面与两性生殖种群基本相似，但两个生殖种群的染色体倍数不同，其生活史也存在显著差异（周金林等, 2004），且两者之间有明显的生殖隔离（陈雪洁, 2012）。但从不同基因构建的系统发育树来看，孤雌生殖种群与两性生殖种群之间的遗传距离仍属于种内范畴。 　1．3 抗菌肽简介 抗菌肽一般指具有广谱抗菌活性的一类小分子多肽，氨基酸数目一般小于100，分子量大多小于10kDa，且多数带正电荷（等电点大于7），属于阳离子多肽。最早的抗菌肽是通过蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）刺激诱导惜古比天蚕（Hyatophora cecropia）产生的，并命名为天蚕素（Boman et al., 1972）。之后在昆虫及两栖类，甚至从原核生物到高等动物乃至人类都有发现。由于对抗菌肽的研究越来越重视，有关抗菌肽数据更新库APD（http://aps. / AP/main.php）（Guangshun et al., 2009）建立，除此之外还有新加坡的一个数据库（http://defensins.bii.a- .sg/）（郭超, 2015）也较有权威性。目前已经发现并报道的抗菌肽有两千多条，尽管抗菌肽的种类繁多，来源广泛，但其依然具有共同特性：广谱的抗菌性，分子量小，多为短肽、阳离子多肽，热稳定性强（吴静等, 2011）。因抗菌肽作为国际生物领域的研究热点及其具本身具有的特性，抗菌肽的研究在医药、食品行业、农业等领域取得了一定的成效。 根据抗菌肽来源可以将其分为： 昆虫抗菌肽，昆虫分布广泛，在世界上生物种群种类繁多，已发现的昆虫抗菌肽二百余种； 两栖动物抗菌肽，两栖动物在世界大部分的地区都有分布，一共有7356种(Frost , 2010)，且其自身体内先天存在一些抗氧化肽、抗菌肽、抗病毒肽等（郭超, 2015）； 植物抗菌肽，能够抑制植物病原菌的生长，结构上多含有半胱氨酸，形成二硫键； 哺乳动物抗菌肽，主要在先天性免疫中发挥作用，主要分为defensins bactenecins 和cathelicidins几大家族，其中人类防御素属于抗菌肽中的一个大家族，依据二硫键的位置分为α-防御素β-防御素θ-防御素Erik and Wuyuan, 2007)； 细菌抗菌肽，又称为细菌素，目前APD数据库收录的有一百余种。依据结构上的特点分为：α-螺旋型β-折叠型4种胞膜渗透的模型：毯式模型，桶板模型，凝聚模型，环形孔模型。随着研究的深入