一步法生产尸胺谷氨酸棒杆菌基因工程菌构建及发酵条件优化.pdf

摘要 18世纪工业革命以来，石油资源的大量消耗导致大气C02含量的迅速升高。 而C02含量的升高促成了全球气候变暖。使用可再生资源生产聚合物成为解决 这一问题的方法之一。每年全世界大约生产1,200，000吨聚酰胺，其中尼龙．6和 尼龙．66约占90％。如果我们能用可再生资源来生产聚酰胺，这将能有效遏制全 球气候变暖。尼龙66是由己二胺和己二酸l：1聚合生成。尸胺(1，5．戊二胺)是 赖氨酸脱羧的产物，它的结构与己二胺非常相似，可以替代由石油制备的己二胺， 已有技术可以将尸胺精炼后和己二酸工具合成具有实用性的尼龙．56，尼龙．56是 一种耐高温的新型塑料。 为使谷氨酸棒杆菌能生产尸胺，必须要在谷氨酸棒杆菌细胞内表达外源 alvei 赖氨酸脱羧酶基因。本研究在前期工作的基础上，以蜂房哈夫尼菌Hafnia ASl．1009基因组为模板，通过PCR扩增，得到大小约为2．2kb的赖氨酸脱羧 酶基因ldc。以大肠杆茵／谷氨酸棒杆菌穿梭质粒pXMJl9为载体，将扩增得到 的目的基因片段克隆至C TK260512，获得重组菌株C glutamicum glutamicum kD。 示赖氨酸脱羧酶基因得到了表达，它编码的蛋白质分子量为83 利用250mL三角瓶发酵，对重组菌株C glutamicum 的尸胺发酵条件进行了优化，确定了进行摇瓶发酵的合成培养基配方及培养条 件。 0．6％， 4％、豆饼水解液5％，CH3COOH (1)培养基：葡萄糖11％、(NH4y2S04 2．5 0．75 50 50 K2HP04 mg／L，FeS04’7H20 e,／L，MgS04·7H20e,／L，CaCl2‘2H20 13 mg／L，MnS04·5H20mg／L，烟酸14m∥L，硫胺素盐酸盐7mg／L，生物 素O．5 me,／L，磷酸吡哆醛O．5mg／LQH7．0)。 (2)‘接种量：8％ mL／250 (3)装液量：30 mL三角瓶 r／min (4)震荡频率：200 重组菌株Cglutamicum 经36 h发酵，尸胺最终产量达到2．52∥L，比优化前提高了83％。 关键词：赖氨酸脱羧酶；谷氨酸棒杆菌；尸胺 ABSTRACT theIndustrialRevolutionofthe18th of ．Since century,heavyconsumption resourceshasresultedan ofcarbon has petroleum rapidproduction dioxide，which contributedto solutionofthis istoUSe escalatingglobalwarming．One problem derivedfromrenewableresources．Aboutto