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动物水平
临床组织
细胞水平
建立裸鼠肠癌肝转移模型
Y沉默后,细胞增殖能力显著降低 500例肠癌
组织样本收集
表 Y沉默后,过表达X ,细胞增殖有稍许增强 In vivo验证X-Y轴对肠癌
型 X沉默后,细胞增殖被抑制,迁移能力显著降低 细胞体内成瘤能力的影响 免疫组化检测X、
研 Y蛋白表达和定位
究 X沉默后 ,过表达Y对细胞增殖、迁移无显著影响 In vivo验证X-Y轴对肠癌
细胞体内肝转移能力的影响
相关性分析
基因芯片鉴定X、Y 阐明X-Y在肠癌
在肠癌肝转移组织 肝转移模式中的
中特异性高表达 作用及机制
机 半乳糖基转移酶抑制剂验证其在X介导肠癌细胞肝转移中的作用 对目标序列区域进行分
制 析,设计点突变,
验证XY结合的位点
研 qPCR、WB验证X对半乳糖基转移酶的调控
究 对X的序列进行分段,分别
半乳糖基转移酶可能是X调节肠癌细胞肝转移模式的关键 构建载体,用Co-IP的方法
检测与Y结合的区域
基因芯片筛选X沉默后下游分子变化
EMSA/Co-IP实验验证X-Y
的RNA/蛋白相互作用
下游信号通路
X-Y的精细调节机制
形态学观察、倍增时间、细胞活率检测
mES 标准体系培养 生物学特性检测 染色体核型分析、AP 检测
免疫组化、FACS 特异标志物、RT-PCR 检测
EBs 形态学观察
m
E RT-PCR 检测
S
非
分
化 mES 分化为EBs LN, FN, E-cadherin 表达差异检测 FACS 检测
增
殖
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