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实验五 石蜡切片制作 一、显微切片技术产生的原因 • 光学显微镜发展到一定程度之后，渴望知道细胞结构； • 由于组织太厚，光线很难穿过 • 压片可使组织变薄，但引起变形、易位，除核外，看 不到其他结构，因此需要切片变薄； • 因细胞水多，太软，无法切片； 鉴于上述情况找到一种方法使细胞水被替代， 变硬，能直接切片，最广泛使用的是石蜡切片技术。 国家级精品课程生命科学导论 肉眼 光学显微镜 透射电镜 分 辨 0.2mm 0.2µm 0.2nm 率 可观察头 可观察细胞的 可观察细胞内的结构, 应 发丝、双 结构 包括各种细胞器结构 用 面刀刀刃 (最大有效倍数:1000) 分辨DNA、蛋白质等 范 的厚度 生物大分子（放大倍数可 围 达百万倍） 观察半薄切片 观察超薄切片 国家级精品课程生命科学导论 肉眼观察 半薄切片 超薄切片 二、石蜡切片技术的优点 便于推广、经济、适用、简便。  经济,价格低，可反复使用；  技术难度不大，容易掌握，但要精通也不 容易；  设备要求不高 ；  可长期保存；  染色容易，形成好的反差和好的选择性。 国家级精品课程生命科学导论 三、石蜡切片的主要过程 第一阶段：取材、固定、脱水、透明、透 蜡、包埋； 第二阶段：切片、、展片、贴片、脱蜡、 复水、染色、封片； 国家级精品课程生命科学导论 第一阶段 国家级精品课程生命科学导论 （一）取材 • 植物取材：用剪刀剪下材料 时植物要生活正常，不要因 缺水、营养和温度光照发生 明显改变，影响细胞结构， 同时发育程度、部位要准确。 厚度不超过3mm，体积不应大 于15mm ×5mm×3mm. 国家级精品课程生命科学导论 （二）固定 1.目的： 为了使取样的细胞在形态结构和成 分方面保持与生活的状态一样，就必 须迅速杀死细胞避免失水变形，自溶 破坏结构等。 常用的固定剂： 卡诺固定液，FAA固定液，铬酸-醋酸固定液 国家级精品课程生命科学导论 FAA固定液：又称标准固定液,万能固定液。适用 于一般根,茎,叶,花药,子房组织切片。在植物形 态解剖研究上应用极广。 FAA优点：兼有保存剂作用,冰醋酸既能抵消酒精 和甲醛对组织的收缩作用又是细胞核的优良固定 剂，沉淀核蛋白，且对免疫组化无碍更无掉片之 理。FAA固定液具有强大的固定效能，较之单纯 固定更科学更快更好！ 国家级精品课程生命科学导论 FAA固定时间不受限制，短则数小时，长可延至 数月或数年。 配方： 50％或70％酒精 90毫升 冰醋酸 5毫升 福尔马林