基因工程的基本操作步课件摘要.ppt

专题1 基因工程 ③常用法： ②常用菌： ①微生物作受体细胞原因： 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少 ④过程： 大肠杆菌 Ca2+处理获得感受态细胞 Ca2+处理 大肠杆菌 感受态 细胞 表达载体 与感受态 细胞混合 感受态细胞 吸收DNA ___感受态细胞法 （1）将目的基因导入微生物细胞 若通过基因工程生产人的糖蛋白可以用大肠杆菌作为工程菌吗？ 不可以，糖蛋白上的糖链是在内质网和高尔基体上加工完成，而内质网和高尔基体存在真核细胞中，大肠杆菌是原核生物，细胞中不含这两种细胞器。 以酵母菌作为工程菌可以吗? 可以，酵母菌为真核生物（真菌类）。 将目的基因导入植物细胞的方法： （1）农杆菌转化法 ①农杆菌特点： 易感染双子叶植物和裸子植物，对大多数单子叶植物没有感染能力 ②原理：Ti质粒上的T---DNA可以转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上。 ③过程： （2）基因枪法 （3）花粉管通道法 将目的基因导入动物细胞 ①方法：显微注射法 ②程序： 目的基因表达载体提纯 取卵（受精卵） 显微注射 受精卵 新性状动物 受体细胞 种类 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 常用方法 显微注射法 用 处理 受体细胞 体细胞 原核细胞 转化过程 目的基因表达载体提纯 ↓ 取卵 ↓ 显微注射 ↓ 受精卵发育 ↓ 获得具有新性状的动物 【基因工程步骤3】将目的基因导入受体细胞（简称 ） 农杆菌转化法 转化 目的基因插入Ti 质粒的T-DNA上 导入植物细胞 整合到受体细胞 的DNA上 表达 Ca2+处理细胞 感受态细胞，感受态细胞与表达载体 混合 感受态细胞吸收DNA分子 Ca2+ 受精卵 抗虫基因 是否插入 mRNA 抗虫蛋白质 抗虫个体 【基因工程步骤4】目的基因的检测与鉴定 1.检测 转基因生 物的DNA 探针 15N 15N 14N 14N （1）检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了 目的基因 基因探针： 放射性同位素等标记的DNA分子 方法—— DNA分子杂交技术 变性 变性 变性 方法—— DNA-RNA分子杂交法 （2）检测目的基因是否转录出了mRNA 探针 15N 15N 转基因生物 的mRNA 14N 14N 提取 （3）检测目的基因是否翻译成蛋白质 方法——抗原-抗体杂交 苏云金杆菌 Bt毒素蛋白 将Bt毒蛋白注射小鼠体内 从小鼠血管抽出血液分离出抗Bt毒素的抗体 抗体 蛋白质 出现杂交带 脱分化 组织培养 证明：提取蛋白质与Bt毒素蛋白质一样 　　例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。 2.鉴定——个体生物学水平的鉴定 （1）多细胞个体 抗虫、抗病结种实验，活性比较实验 不能，受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达。 受体细胞摄入DNA分子后就说明目的基因完成了表达吗？ 若不能表达，要对抗虫基因再进行修饰。 【思维发散】 基因工程四部曲的每一步是不是都要涉及碱基互补配对？ 基因工程步骤3将目的基因导入受体细胞不涉及 ●牛刀小试3 运用现代生物技术，将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因整合到棉花细胞中，为检测实验是否成功，最方便的方法是检测棉花植株是否有(　 　) A. 抗虫基因 B. 抗虫基因产物 C. 新的细胞核 D. 相应性状 D 1.下列哪一个不是基因表达载体的组成部分（ ） A．终止密码 B．目的基因 C．标记基因 D．启动子 A mRNA上的UAA，UAG，UGA 3．下图是利用基因工程技术生产人胰岛素的操作过程示意图， 有关的叙述中错误的是（ ） A．基因工程的核心是基因表达载体的构建 B．可以利用人的皮肤细胞来完成①过程 C．过程②必需的酶是逆转录酶，过程③必需的酶是解旋酶 D．利用AB获得C的过程中，必须用同一种限制性内切酶切割A和B， 使它们产生相同的黏性末端 B　 1.2 基因工程的基本操作程序 (一)、目的基因主要是__________________ 编码蛋白质的基因 如：与生物抗性相关的基因、与优良品质相关的基因、与生物药物和保健品相关的基因、与毒物降解相关的基因、与工业用酶相关的基因、具调控作用的因