嗜铬粒蛋白A在扩张型心肌病中的表达及和心肌纤维化的关系和机制的研究.pdf

摘要 中文摘要 嗜铬粒蛋白A(CGA)广泛分布于神经内分泌系统，因其半衰期长而成为评估 整个神经内分泌系统活性的强有力指标。在扩张型心肌病中，交感神经兴奋性的长 期低水平增强对于疾病进程具有激活作用；促进心肌细胞死亡、凋亡和刺激心肌间 质胶原的增生重构，使心肌间质胶原增加、I型胶原和Ⅲ型胶原比例失调，从而使 心肌细胞失去了坚韧的胶原支持而变形，左心室在功能上从压力泵转换为容量泵， 心室球形化，最终导致心衰。现已发现在心血管系统中，CGA具有交感神经抵抗作 用，并与慢性心衰症状的严重程度和预后密切相关；分子水平上CGA参与了对纤 维母细胞的黏附和伸展作用，提示其与心肌重塑有关。然而CGA与心肌纤维化的 作用目前未见报道。因此本实验拟观察CGA在扩张型心肌病表达的量与部位的变 化，探讨CGA与心肌纤维化的关系，以进一步研究神经内分泌因素在DCM中的作 用，从而为临床心肌纤维化的评估提供新的指标和思路。 已知在人体中，CGA作为一个前体肽，在不同的组织中被分解为不同的分泌片 段发挥其相应的作用。Catestatin(Human 是目前为止已知的CGA家族中唯一直接作用于烟碱受体而发挥作用的。同时作为 强有力的内源性烟酸胆碱受体拮抗剂，抑制儿茶酚胺的释放，并具有负性肌力作用。 那么抑NJL茶酚胺的释放和功能，是否对心肌细胞凋亡、成纤维细胞增殖和迁移有 用，观察心肌纤维化的发生，并进一步探讨eatestatin影响心肌纤维化的可能机制。 第一部分嗜铬粒蛋白A在扩张型心肌病中的表达 目的观察扩张型心肌病(DCM)患者外周血及心肌组织中嗜铬粒蛋白A(CGA) 的表达。 方法收集DCM患者及正常健康志愿者外周血血清，用ELISA方法检测样本 血清中CGA水平。取DCM心脏移植患者的废弃心肌组织样本，以及排除心脏疾病 的脑外伤尸检心肌组织标本。利用RT-PCR技术检测心肌中嗜铬粒蛋白(CGA)的 mRNA在DCM心肌和正常心肌中的表达变化；应用免疫组化鉴定心肌中CGA的 分布位置及其表达强弱变化。 中CGA颗粒粗大、部位密集，与正常心肌样本比较有统计学意义(P0．05)。 4 摘要 结论：作为神经内分泌活性强有力指标的CGA在DCM心肌及外周血循环中表 达均升高。 ． 【关键词】嗜铬粒蛋白A；扩张型心肌病 第二部分扩张型心肌病中嗜铬粒蛋白A的表达与心肌纤维化的关系 维化程度及其二者间的关系，初步探讨CGA在心肌纤维化进程中的作用。 方法取DCM—tl,脏移植患者的心肌组织标本作为研究对象，排除心脏疾病的脑 外伤尸检-tl,肌组织标本作为对照。利用Real-timePCR方法检测一tl,肌中嗜铬粒蛋白A (CGA)及I型胶原纤维(COL 的分布位置及其表达强弱变化；运用苦昧酸天狼猩红特异染色和偏振光显微镜显像， 并辅以图象分析软件计算心肌胶原容积积分(CVF)；并对CGA与心肌纤维化的相 关性进行形态学上的比较。 心肌中胶原容积积分较正常心肌增加(P0．001)。Real．timePCR证实心肌中 CGA．mRNA与COL 部位及其分布密集区域的附近，心肌纤维化明显。 结论DCM心肌中CGA的表达与心肌纤维化具有密切的相关性。由此可以推 测DCM心肌组织中CGA的表达水平影响着心肌纤维化的发展。 【关键词】嗜铬粒蛋白A；扩张型心肌病；心肌纤维化 第三部分catestatin抑制心肌纤维化的机制探讨 发生、发展，并进一步探讨catestatin影响心肌纤维化的可能机制。 方法按照人eatestatin序列(Human 分析其纯度。取1．3d的SD大鼠，在无菌条件下从心肌中利用差速贴壁法分离出心 应用流式细胞技术(FACS)检测各组心肌细胞的凋亡率，以观察ISO对心肌细胞 采用细胞划痕损伤实验检测不同浓度catestatin对成纤维细胞迁移的影响。 5