动物细胞工程课件解析.ppt

2.考点解读 (1)原理：动物细胞核的全能性(不能说动物细胞全能性)。 (2)卵母细胞选择时期及原因：减Ⅱ中期的卵母细胞,此时具备受精能力,细胞质中合成与分裂分化有关的物质能刺激融合后重组细胞进行分裂分化,形成重组胚胎。 (3)选卵细胞做受体细胞原因 ①大,易于操作;②卵黄多,营养丰富,为发育提供充足的营养;③激发重组细胞分裂分化。 (4)供体细胞：取供体动物的体细胞培养,一般选用传代10代以内的细胞,因为10代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型,保证了供体细胞正常的遗传基础。 (5)该过程用到的技术手段：动物细胞培养、动物细胞融合、早期胚胎培养和胚胎移植。 (6)核移植产生的克隆动物与提供细胞核的亲本不同原因：①克隆动物细胞质基因来源于另一个亲本。所以与植物组织培养不同(只来自于一个亲本),克隆动物遗传物质来自2个亲本。②在发育过程中可能发生基因突变,染色体变异导致性状改变。③外界环境条件的影响引起不可遗传的变异。 3.应用及存在问题 (1)应用：加速家畜遗传改良进程、促进优良畜群繁育、保护濒危物种、克隆器官用于移植等。 (2)存在问题：①成活率低;②克隆动物的健康问题;③克隆动物食品的安全性问题。 为什么灭活的病毒能作为诱导剂？ 不灭活的病毒能作为诱导剂吗？ 灭活的病毒颗粒 黏附于细胞表面 细胞膜被病毒 颗粒穿通 细胞膜连接 细胞融合，形成杂种细胞 (细胞膜具有一定的流动性) 细胞核 病毒颗粒 细胞核 生物法： 灭活的病毒 丧失感染性 （不感染细胞） 保留融合活性 仙台病毒 紫外线 动物细胞融合技术的意义 打破生殖隔离，使远缘杂交成为可能； 广泛应用多个学科领域； 重要用途：制备单克隆抗体。 1.抗体是由何种细胞产生的？ 2.一个B淋巴细胞(浆细胞)能分泌多种 抗体吗？ 3.简述获得抗体的传统途径？ 4.这种方法获得的抗体有什么缺陷？ 传统血清抗体的制备： 方法：向动物体内反复注射某种抗原， 然后从动物血清中分离所需要的抗体。 特异性差、纯度低；产量低、反应不够 灵敏 传统血清抗体的制备的缺陷： 1.单克隆抗体McAb（概念） 由单个B淋巴细胞经过无性繁殖(克隆), 形成基因表达相同的细胞群，这一细胞群 所产生的化学性质单一、特异性强的抗体 称为单克隆抗体。 一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖 杂种细胞 动物细胞 培养技术 2.设计思路： 动物细胞融合 单克隆细胞系 既能产生特异性 抗体,又能大量繁殖 单克隆抗体的制备 单克隆抗体 单克隆抗体的制备 免疫小鼠 注射特定的 抗原蛋白 培养骨髓瘤细胞 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 融合 多种杂交细胞 在具有筛选作用 的培养基上培养 专一抗性 检验阳性 克隆上述杂交细胞 单克隆抗体的制备 单克隆抗体的制备 单克隆抗体的制备 制备过程： 1.注射抗原的目的是什么？ 2.诱导其融合的方法有哪些？ 3.融合后培养液中有几种细胞？ 4.怎样筛选出杂交瘤细胞，杂交瘤细胞 有何优点？ 5.为何要进行克隆化培养和专一抗体检测， 多次筛选？ 6.大量增殖杂交瘤细胞获得单抗的方法? 制备单克隆抗体的方法是用缺乏次黄嘌呤 磷酸核糖转化酶或胸腺嘧啶核苷酸酶的瘤细胞 变异株与脾脏的B细胞融合。 采用HAT选择性培养基（培养基中加次黄嘌呤HyPoxanthine?H，氨基喋呤Aminoopterin?A及 胸腺嘧啶核苷Thymidine?T），在这种选择性 培养基中，由于变异的瘤细胞不具有次黄嘌呤 磷酸核糖转化酶或胸腺嘧啶核苷激酶，所以不能利用培养基中的次黄嘌呤或胸腺嘧啶核苷而 合成DNA。而只能利用谷酰胺与尿核苷酸单磷酸合成DNA，这一途径又被氨基喋呤所阻断， 所以未融合的瘤细胞不可避免也要死亡。 融合的杂交瘤细胞由于脾淋巴细胞具有 次黄嘌呤磷酸核糖转化酶，可以通过次黄 嘌呤合成DNA，克服氨基喋呤的阻断，因此 杂交瘤细胞大量繁殖而被筛选出来。B淋巴 细胞在一般培养基中不能长期生长，一般于 二周内均死亡。 有限稀释法： 将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养， 使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖。 然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，那些 上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。 阳性孔中的细胞还 不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续 进行有限稀释，一般需进行3～4次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的 克隆化培养。 单克隆抗体的应用： ①作为诊断试剂：准确识别各种抗原 物质，并与特异性结合 ②用于 运载药物：制成“生物导弹” 治疗疾病：主要用于癌症治疗 动物细胞工程 高三（理）生物 提问 植物细胞工程都有哪些重要技术？ 植物组织培养为什么最重要？ 植物体细胞杂交能创造什么奇迹？ 动物细胞的全能性和