EM菌定向培养课程.docVIP

EM菌定向培养 1.光合细菌 (1)培养基: 1)酵母膏 3 g/L 蛋白胨 3 g/L CaC12 0.3 g/L MgSO4 0.5 g/L PH自然 (保存用) 酵母膏 0.1 g/L NH4C1 1.0 g/L NaAC 3.5 g/L MgC12 0.1 g/L CaC12 0.1 g/L KH2PO4 0.6 g/L K2HPO4 0.4 g/L PH7.2(富集用) NaAC 2 g/L NaHCO3 1 g/L NH4C1 1 g/L NaC1 1 g/L KH2PO4 0.5 g/L K2HPO4 0.2 g/L MgSO4 0.2 g/L CaC12 0.01 g/L 蛋白胨 1 g/L 酵母膏 0.3 g/L PH7.2-7.6 (分离纯化用) (2) 定向培养: 1)富集培养 :10mL/15×150mm试管, EM菌0.5mL石蜡封面 28℃-30℃ 7-14天(10天) 连续光照(1000-3000lx),60w灯泡距离30-40cm. 颜色由浅呈桃红至棕红色 重复一至二次,取富集液0.5mL在相同条件下定向富集. 梯度稀释: 10-4?10-5?10-6 双琼脂平板培养 半固体保存 半固体混菌 挑单菌落划线 典型单菌落 10mL/15×150mm试管 静置2-3h 穿刺接种 混匀.表面封无菌石蜡 注入上层半固体琼脂(0.8%) 同样条件下 连续光照28℃-30℃ 7-10天 连续光照 7-10天备用 颜色由浅至棕红色 28℃-30℃ 7-10天 EM菌中光合细菌平板培养,25-28℃ PH 6.5-7.6 8-14天 种类多菌落较大? 2. 乳酸菌 (一株浅黄边缘整齐,另一株灰白色边缘不整齐) 培养基: 1)牛肉膏 10 g/L 蛋白胨 10 g/L 酵母膏 10 g/L 番茄汁20% 葡萄糖 10 g/L 吐温 0.05% CaCO3 20 g/L 溴甲酚绿 0.01% PH 6.0-6.5 2)酵母膏 7.5 g/L 葡萄糖 10 g/L 番茄汁 100 mL 蛋白胨 7.5 g/L KH2PO4 2.0 g/L 吐温 0.5 mL PH 6.0-6.5 葡萄糖 20 g/L 酵母膏 10 g/L PH 6.0-6.5 4)蛋白胨 8- 10 g/L 酵母膏 3- 5g/L 葡萄糖 13- 15g/L KH2PO4 1.5- 2.0 g/L MgSO4 0.3-0.5 g/L MnSO4 0.2-0.25 g/L NaAC 3.0-5.0 g/L PH 5.5-6.5 5)蛋白胨 0.8- 1.0 g/L 糖蜜 3.0-5.0 g/L 酵母膏 3-5g/L 玉米浆0.5- 1.0g/L KH2PO4 0.1- 0.3 g/L MgSO4 0.3-0.5 g/L NaC1 3-5 g/L 葡萄糖 8- 10g/L PH5.5-6.5 (发酵或种子培养基) 6)MRS培养基? 蛋白胨 10.0 g?牛肉膏 10.0g? 酵母膏 5.0 g? 柠檬酸氢二铵 2.0 g? 葡萄糖 20.0g? 吐温 80 1.0 mL? 乙酸钠 5.0 g? 磷酸氢二钾 2.0g?硫酸镁 0.58 g?硫酸锰 0.25 g?琼脂 18.0 g? 蒸馏水1L, pH 6.5?(分离培养基),当MRS培养基冷却至45~50℃时,加入已灭菌的碳酸钙, 充分混匀,倒平板? (2)定向培养: 1)富集培养:150mL/250mL三角瓶密封培养,Em菌3%,30℃-35℃