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II 蓝藻ITS 序列拷贝类型、进化关系及系统学适用性分析 中文摘要 中文摘要 蓝藻16S rRNA-23S rRNA 基因间隔区（16S rRNA-23S rRNA internal transcribed spacer, ITS ）序列在长度和碱基组成上具有较高的变异性，因此有学者将其应用于 蓝藻分类鉴定及系统发育研究。然而目前报道的蓝藻 ITS 序列拷贝分布情况以及 不同拷贝类型间进化关系分析等数据有限，且 ITS 序列是否适用于蓝藻种水平分 类阶元的研究亦存在争议。鉴于以上原因，本课题就蓝藻 ITS 序列的拷贝分布情 况、不同拷贝类型之间的进化关系及其系统学研究适用性进行分析。 采用形态学方法和基于 16S rRNA 基因的分子生物学方法对24 株蓝藻样品进 行分类鉴定；PCR 扩增检测 ITS 序列拷贝分布情况；割胶回收扩增的拷贝条带并 克隆测序。结果显示：（1）蓝藻的ITS 序列至少存在三种拷贝类型，即ITS-IA 型( 同 时携带tRNAIle 和tRNAAla 编码区的ITS) 、ITS-I 型（只携带tRNAIle 编码区的ITS ）、 ITS-N 型 （无tRNA 编码区的ITS ）；（2 ）色球藻目藻株的ITS 序列均为单一拷贝 类型（仅有 ITS-IA 或 ITS-I 型）；颤藻目藻株的 ITS 序列为单一拷贝类型（仅有 ITS-IA 或ITS-I 型）或两个拷贝类型（同时具有ITS-IA 和ITS-N 型）；念珠藻目藻 株的ITS 序列为单一拷贝类型（仅有ITS-IA 型)或两个拷贝类型（同时具有ITS-IA 和ITS-N 型）；真枝藻目藻株的ITS 序列均为两个拷贝类型（同时具有ITS-IA 和 ITS-N 型）。 以ITS 序列为单一拷贝类型的4 株席藻（Phormidium ）样品和基因库（Genbank ） 中已知ITS 序列的12 株席藻为实验材料，采用Clustal X 1.83 软件进行序列比对和 人工校正；采用PAUP* 4.0b4a 软件以最大简约法(maximum parsimony，MP)和最 大似然法(maximum likelihood，ML)构建系统发育树，探讨席藻属内两种不同拷贝 类型间的进化关系。结果显示：采用两种处理方式得到的系统发育树，均显示 ITS-IA 型和ITS-I 型的种类各自聚为一个组群，ITS-IA 型形成组I，ITS-I 型形成 组II，且组I 的节点较组II 出现的早，表明ITS-I 型极有可能是由其原来的ITS-IA 型缺失tRNAAla 编码区进化而来，ITS-IA 型应为蓝藻ITS 序列的基本结构。 以鱼腥藻属（Anabaena ）和节旋藻属（Arthrospira ）内种名明确的藻株为实验 I 中文摘要 蓝藻ITS 序列拷贝类型、进化关系及系统学适用性分析 材料，构建基于 ITS 序列的系统发育树，对其作为蓝藻属内种间分类水平的分子 标记适用性进行分析。结果显示：在基于鱼腥藻属ITS 序列的系统发育树中，ITS 序列能够将13 株分布于5 个不同种的鱼腥藻藻株在种间水平上明确地区分开来， 而在基于节旋藻属ITS 序列的系统发育树中，13 株分布于4 个不同种的节旋藻藻 株在种间水平上并未完全区分开来。上述结果表明，蓝藻的 ITS 序列在属内种间 水平的系统学研究上具有一定的局限性。 关键词：蓝藻，16S rRNA-23S rRNA 基因间隔区，拷贝类型，进化关系，系统发育 作 者：焦淑静 指导教师：史全良 II 蓝藻ITS 序列拷贝类型、进化关系及系统学适用性分析 英文摘要 Analyses on the Type of Copy an