快速检测软骨藻酸的间接ELISA方法.pdfVIP

第 ３４ 卷第２ 期 环　 境　 科　 学　 学　 报 Ｖｏｌ．３４，Ｎｏ．２ ２０１４年２月 　Ａｃｔａ Ｓｃｉｅｎｔｉａｅ Ｃｉｒｃｕｍｓｔａｎｔｉａｅ Ｆｅｂ． ，２０１４ 刘淑娟，赵晓祥，程金平，等．２０１４．快速检测软骨藻酸的间接ＥＬＩＳＡ方法［Ｊ］．环境科学学报，３４（２）：４０４⁃４０８ Ｌｉｕ ＳＪ，Ｚｈａｏ Ｘ Ｘ，ＣｈｅｎｇＪ Ｐ，ｅｔ ａｌ． ２０１４．Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ｏｆ ｉｎｄｉｒｅｃｔ ＥＬＩＳＡ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｄｏｍｏｉｃ ａｃｉｄ［Ｊ］．Ａｃｔａ Ｓｃｉｅｎｔｉａｅ Ｃｉｒｃｕｍｓｔａｎｔｉａｅ，３４（２）：４０４⁃４０８ 快速检测软骨藻酸的间接ＥＬＩＳＡ方法 １，２ ２ １，∗ １ １ 刘淑娟 ，赵晓祥 ，程金平 ，王茜 ，王文华 １． 上海交通大学环境科学与工程学院，上海２００２４０ ２． 东华大学环境科学与工程学院，上海２０１６２０ 收稿日期：２０１３⁃０６⁃２９　 　 　 修回日期：２０１３⁃０９⁃０２　 　 　 录用日期：２０１３⁃０９⁃０３ 摘要：分别对抗原、一抗、二抗的最佳稀释倍数、温育温度与时间、包被条件及其显色条件进行了优化，建立了一种快速检测软骨藻酸（Ｄｏｍｏｉｃ ａｃｉｄ，ＤＡ）的酶联免疫分析法（ＥＬＩＳＡ）．结果表明：抗原、一抗和二抗（ＨＲＰ⁃ＩｇＧ）最佳稀释度分别为１∶１２８００倍、１∶４００倍和１∶３０００倍；最佳包被 条件为４ ℃包被１２ ｈ；抗原抗体最佳反应温度为３７ ℃，反应时间为６０ ｍｉｎ；二抗最佳反应温度为４３ ℃，反应时间为３０ ｍｉｎ；最佳显色条件为室 －１ 温不避光显色２０ ｍｉｎ．该方法的样品加标回收率高达８６．８％ ～１０３．２％，其最低检测限（ＬＯＤ）为４．８６ ｎｇ·ｍＬ ，光吸收值（ＯＤ值）的变异系数 （ＣＶ）在２．４６％ ～７．０８％之间． 关键词：软骨藻酸；间接竞争ＥＬＩＳＡ法；快速检测 文章编号：０２５３⁃２４６８（２０１４）０２⁃４０４⁃０５　 　 　 中图分类号：Ｘ１３１　 　 　 文献标识码：Ａ Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ｏｆ ｉｎｄｉｒｅｃｔ ＥＬＩＳＡ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｄｏｍｏｉｃ ａｃｉｄ １，２ ２ １，∗ １ １ ＬＩＵ Ｓｈｕｊｕａｎ ，ＺＨＡＯ Ｘｉａｏｘｉａｎｇ ，ＣＨＥＮＧＪｉｎｐｉｎｇ ，ＷＡＮＧ Ｑｉａｎ ，ＷＡＮＧ Ｗｅｎｈｕａ １． Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＳｈａｎｇｈａｉＪｉａｏｔｏｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２００２４０ ２． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｄｏｎｇｈｕａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２０１６２０ Ｒｅｃｅｉｖｅｄ２９ Ｊｕｎｅ２０１３；　 　 　 ｒｅｃｅｉｖｅｄ ｉｎ ｒｅｖｉｓｅｄ ｆｏｒｍ２ Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ２０１３；　 　 　 ａｃｃｅｐｔｅｄ３ Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ２０１３ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｎ ｅｎｚｙｍｅ⁃ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ （ＥＬＩＳＡ）ｗａｓｄｅｖｅｌｏｐｅｄｆｏｒｒａｐｉｄ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ｄｏｍｏｉｃａｃｉｄ． Ｔｈｅｉｎｄｉｒｅｃｔ ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅＥＬＩＳＡ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ， ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｄｉｌｕｔｉｏｎ ｒａｔｉｏｓ ｏｆ ａｎｔｉｇｅｎ，ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｎｄ ＨＲＰ⁃ＩｇＧ，ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐａｃｋｅｔｓ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ａｓ ｗｅｌｌ ａｓ ｔｈｅ ｃｏｌｏｒ ｃｏａｔｉｎｇ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｗｅｒｅ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｄｉｌｕｔｉｏｎｒａｔｉｏｓｏｆｔｈｅａｎ