基因工程的基本工具好用课件摘要.pptVIP

表达载体的组成： ａ．目的基因 ｂ．启动子 ｃ．终止子 ｄ．标记基因等 经限制酶和DNA连接酶作用之后，所形成的重组DNA有几种情况？ 3种 目的基因-目的基因 目的基因-载体 载体-载体 个体生物水平鉴定：如抗虫棉的产生 只有通过了检测和鉴定，才标志着转基因的成功。 归纳: 基因工程的基本操作程序 获取目的基因 从基因文库 利用PCR 化学方法人工合成 构建基因表达载体 目的基因、启动子、终止子、标记基因 将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法、显微注射法 目的基因的检测与鉴定 检测：是否插入、转录、翻译 鉴定： 3、将目的基因导入微生物细胞 常用法：Ca2+处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境 中DNA分子的生理状态 常用菌：大肠杆菌 微生物作受体细胞原因： 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少 过程： Ca2+处理大肠杆菌 感受态细胞 重组表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA，完成转化过程 检测— (分子 水平) 个体水平的鉴定—— ①检测转基因生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定，活性鉴定等 方法—— 方法—— 方法—— DNA分子杂交技术 分子杂交技术（注意与上不同之处） 抗原—抗体杂交 四、目的基因的检测与鉴定 归纳步骤 1、检测转基因生物的DNA是否插入 目的基因——DNA分子杂交技术（DNA与DNA杂交） 3、检测目的基因是否翻译成蛋白质 　　方法——　抗原与抗体杂交 2、检测目的基因是否转录出了mRNA 　　方法－－分子杂交技术（ DNA与RNA杂交） 归纳步骤 * * * * * * 补:原核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 启动子：位于基因首端一段能与RNA聚合酶结合并能起始mRNA合成的序列。没有启动子，基因就不能转录。 终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，它能阻碍RNA聚合酶的移动，并使其从DNA模板链上脱离下来，使转录终止。 RNA聚合酶:能够识别启动子上的结合位点并与其结合的一种蛋白质.(以模板转录然后脱落) 编码区 非编码区 非编码区 与RNA聚合酶 结合位点 内含子 外显子 能够编码蛋白质的序列叫做外显子 不能够编码蛋白质的序列叫做内含子 启动子 终止子 编码区上游 编码区下游 内含子： 外显子： 补：真核细胞的基因结构 一、目的基因的获取 二、基因表达载体的构建 三、将目的基因导入受体细胞 四、目的基因的检测与鉴定 回顾：基因工程基本操作的四个步骤 一、目的基因的获取 (一)、目的基因主要是______________________ 编码蛋白质的结构基因 请举出三个以上的例子 （二）、获取目的基因的常用方法有哪些? 1、从基因文库中获取 2、利用PCR技术扩增目的基因 3、人工的方法合成 　基因文库 （gene library） 基因组文库 部分基因文库（如cDNA文库） 将含有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因,称为基因文库(gene library) 1、从基因文库中获取 基因组文库: 通过对受体菌群体的培养而储存生物的 全部基因 是由生物的某一特定器官或特定发育时期细胞内的mRNA经体外反转录后形成的互补DNA片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群就叫做这种生物的cDNA文库 cDNA文库 cDNA文库的构建 提取生物某发育时期的mRNA 反转录（逆转录酶） 单链DNA DNA聚合酶 双链DNA（只含该生物的部分基因） 与载体连接导入受体菌群储存 基因组文库与部分基因文库的关系 基因组文库和部分基因组文库(cDNA文库)比较 2.利用PCR技术扩增目的基因 ① 概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制___________的核酸合成技术 ③条件：_________________________、 ______________ 、 ___________ 、 _______________________ ②原理：__________ ④方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循 环的次数） ⑤结果： 聚合酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA双链复制 已知基因的核苷酸序列（前提） 四种脱氧核苷酸 一对引物 耐热的DNA聚合酶（Taq酶） 指数 2n 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增 ２.利用PCR技术扩增目的基因 ⑥过程： a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DN