基因治疗(概述)课件摘要.ppt

基因治疗的策略 （一）基因修正 通过特定的方法如同源重组或靶向突变等对突变的DNA进行原位修复,将致病基因的突变碱基序列纠正，而正常部分予以保留。 但目前在技术上还无法做到。因为要在人基因组的某个特异部位上进行重组是一个非常复杂的过程。然而原位修复的方法无疑是进行基因治疗最理想的途径和目的。 基因治疗的策略 （二）基因置换 基因置换指去除整个变异基因，用有功能的正常基因取代之，使致病基因得到永久地更正。传统上所谓基因治疗实际上就是指基因替代疗法，就像外科移植手术一样。 基因治疗的策略 （三）基因激活 有些正常基因不能表达并发生了基因突变，而是由于被错误地甲基化或编码区组蛋白去乙酰化所致；也有的是编码区是正常的但调控区发生了突变。 前者可以通过去甲基化或乙酰化使基因恢复活性；后者可以加入正常启动子来激活基因。 但是实现定点去甲基化和乙酰化也非易事；原位修复调控序列也是很难的。 基因治疗的策略 （四）基因增补 又称基因修饰，是指将目的基因导入病变细胞或其他细胞，目的基因的表达产物能修饰缺陷细胞的功能会使原有的某些功能得以加强。 在这种治疗方法中，缺陷基因仍然存在于细胞内，目前基因治疗多采用这种方式。 基因治疗的策略 （五）基因干扰 又称基因失活，有两种干扰方法： 1、抑制有害的基因表达：导入肿瘤抑制基因， （如rb或p53),以抑制癌基因的异常表达。 2、封闭有害基因：用反义RNA或小分子干扰RNA来疯币癌基因，同样不能恢复癌基因的正常功能，但可用来抑制病原体的关键基因。 基因治疗的策略 （六）免疫调节 将抗体、抗原或细胞因子的基因导入患者体内，改变患者的免疫状态，达到预防和治疗疾病的目的。 如将白细胞介素-2导入肿瘤患者体内，提高患者IL-2的水平，激活体内免疫系统的抗肿瘤活性，达到防治肿瘤复发的目的。 基因治疗的策略 （七）药物敏感疗法 应用药物敏感基因转染肿瘤细胞，以提高肿瘤细胞对药物的敏感性。 如向肿瘤细胞导入单纯疱疹病毒胸苷激酶基因，然后给予患者无毒性的环氧鸟苷药物。肿瘤细胞被杀死，而对正常细胞无影响。 基因治疗的策略 脂质体介导法 将目的基因包裹到脂质体内，通过静脉注人体内，脂质体与细胞膜融合而使目的基因进人细胞内。脂质体介导的基因转移能在活体内应用，较为简单，转移效率较低，转移的目的基因不与染色体整合，只能短时间表达。 受体介导的基因转移 将含有目的基因的重组质粒DNA共价连接到能与某种细胞受体结合的配体上，再将这种复合物注人体内，配体与细胞受体特异性结合，发生正常的人胞作用，目的基因从而进人细胞内。这种方式转人的目的基因也不与染色体整合，只能短时间表达。 逆转录病毒载体介导的基因转移 带有外源性基因的重组病毒在感染细胞时.可将外源性基因序列导人细胞内。目前主要使用的病毒载体有逆转录病毒和腺病毒。逆转录病毒可将遗传物质整合到宿主细胞基因组内，因而很合适作基因治疗载体。将野生的逆转录病毒进行重组，除去编码病毒自身蛋白的序列，插人目的基因。 基因治疗的问题 问题互动 目前，基因治疗领域存在的主要问题是有效性和安全性。事实上，自1995 年以来，全世界基因治疗领域的科学家们在改善基因导入系统和载体方面作了大量的努力，新思路、新技术和新方法层出不穷。目前，在基因导入载体方面出现了两大主流：一是非病毒载体系统；二是病毒载体系统。 问题互动 1、什么是基因治疗？ 从广义说，凡是在基因水平上进行操作而达到治疗疾病的所有疗法。 问题互动 2、基因治疗的关键步骤是什么？ 1、目的基因的选择 2、靶细胞的选择 3、选择安全而有效的方法和载体系统 问题互动 2、基因干扰的干扰方法？ 抑制有害的基因表达 封闭有害基因 Company Logo 磷酸钙沉淀法 将氯化钙、DNA和磷酸盐缓冲液混合，即有磷酸钙微沉淀形成，体外培养的细胞可将沉淀吞入细胞内，从而将目的基因导入细胞内。这种方法优点在于简单和通用性，但转化效率通常很低。 Company Logo 显微注射法 在显微镜下，直接将DNA由细胞玻璃针注人细胞核内，可避免DNA的降解，但要求有熟练的操作技巧。 安全性问题 1999年首例基因治疗失败事件 只限于体细胞，提倡间接体内法、主要用于单基因遗传病治疗、疗效显著并经过动物实验验证等。 社会伦理问题 禁止用于生殖细胞 防止不当应用（如体育上） Company Logo Company Logo 基因治疗 Company Logo 目录 基因治疗的发展史 1 基因治疗的概述 2 基因治疗的策略 3 问题互动 5 基因治疗的方式 4 Company L