一种适用于RT-PCR的杉树类植物中总RNA提取的方法.pdfVIP

武汉植物学研究 2004，22(6)：551～556 Journalof Wuhan BotanicalResearch 一 种适用于RT—PCR的杉树类植物中总RNA提取的方法 李菁芳，黄劭毅，田仁鹏，张珞珍，方呈祥 (武汉大学生命科学学院，武汉 430072) 摘 要：杉树类植物含大量的多糖、多酚类物质，这使得此植物的总RNA提取较困难 。研究通过比较几种有代表 性的提取植物总RNA的方法，建立了一种酸酚法和 PEG8000沉淀法相结合的改 良的CTAB法 。此方法操作简单， 使用的试剂均为常规试剂，成本低，能够有效去除植物组织中多糖和多酚类等次生物质，从而得到高质量的RNA。 使用这种改 良的方法制备的总RNA产物对 P450基因成功地进行了反转录聚合酶链式反应 (reversetrans— criptase．polymerasechainreaction，RT—PCR)，证明此方法是一种适用于RT—PCR的杉树类植物组织中总RNA 提取的方法 。 关键词：杉树类植物；RNA提取；次生物质；RT—PCR 中图分类号 ：Q943 文献标识码：A 文章编号：1000—470X(2004)06—0551—06 An ImprovedM ethodSuitedtoExtractTotalRNA UsedtoRT—PCR from FirPlant LIJing—Fang，HUANG Shao-Yi，TIAN Ren-Peng，ZHANG Luo-Zhen，FANG Cheng—Xiang’ (CollegeofLi Sciences，WuhanUniversity，Wuhan 430072。China) Abstract：Firplantscontainplentyofpo1ysacchridesandpolyphenols．Comparing severalstan— dardmethodsforextractingtotalRNA from firplant，amodifiedmethodwhichcaneliminatethe interferencesofpolysacchridesandpolyphenolsintheplanttissueswasconstructedinthepresent study．Thehigh—qualityRNA sampleobtainedbytheimprovedCTAB methodused toRT-PCR (reversetranscriptase—polymerasechainreaction)ofP45Ogenestudy，andtheresultindicated thatthemethodiseasierforoperationand isatlowercost． Keywords：Firplants；RNA extraction；Secondarysubstance；RT-PCR 核糖核酸 (RNA)是分子生物学研究的重要材 及呈现多肽性 ；还可用于测定基因表达的强度 ，尤其 料之一，无论是 cDNA文库的构建 、Northern杂交 是在可获得的mRNA数量有限以及 目的基因表达 分析和分离基因，还是研究基因的转录调控都需要 水平很低~-,]OIJ用RT．PCR方法来分析L1]。获得高质 高纯度且保持完整性的RNA。反转录聚合酶链式反 量的总RNA是进行 RT．PCR十分重要 的基础步 应 (reversetranscriptase-polymerasechainreac． 骤 。从植物组织中制备RNA方法已有许多报道，其 tion，RT．PCR)是一种从 RNA扩增 cDNA拷贝的 中酸性酚一硫氰酸胍．氯仿法[、一步法 和苯酚法 。] 方法 。RT．PCR对于获得与克隆mRNA的5’与 3’ 等可用于绝大多数动植物组织 中RNA的提取 。不 末端序列以及用极少量的mRNA样品构建大容量