紫花苜蓿NAC转录因子MsNAC1基因的克隆、生物信息学分析及非生物逆境胁迫下的表达分析.pdfVIP

植物遗传资源学报２０１４，１５（６）：１３１２⁃１３１９ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ＤＯＩ：１０．１３４３０／ ｊ．ｃｎｋｉ．ｊｐｇｒ．２０１４．０６．０２０ 紫花苜蓿ＮＡＣ转录因子ＭｓＮＡＣ１基因的克隆、 生物信息学分析及非生物逆境胁迫下的表达分析 申玉华，徐振军，杨晓坡，相吉山，文　 静，黄文婕 （赤峰学院生命科学学院，内蒙古赤峰０２４０００） 　 　 摘要：ＮＡＣ转录因子是高等植物所特有的具有多种生物功能的转录因子，在植物生长发育、抵抗逆境和激素调节等过程 中发挥着重要作用。 本研究利用 ＲＡＣＥ⁃ＰＣＲ 技术，克隆获得了紫花苜蓿 ＮＡＣ 转录因子 ＭｓＮＡＣ１（ＧｅｎＢａｎｋ 登录号为 ＪＮ０９９３８４１）基因的ｃＤＮＡ序列。 生物信息学分析显示，ＭｓＮＡＣ１基因的开放阅读框（ＯＲＦ）为９９３ ｂｐ，编码一个由３３０ 个氨基 酸残基组成的亲水性蛋白，Ｎ⁃端具有保守的ＮＡＭ结构域，Ｃ⁃端高度变异，具备ＮＡＣ转录因子的基本特征；ＭｓＮＡＣ１蛋白被定 位在细胞核中，含有２ 条核定位信号序列，具有９ 个糖基化位点和２３ 个磷酸化位点，三级结构为对称的同型二聚体。 多重比 对发现，ＭｓＮＡＣ１蛋白与拟南芥ＡＴＡＦ１和水稻ＯｓＮＡＣ６蛋白的同源性较高；系统进化分析表明，ＭｓＮＡＣ１蛋白属于ＮＡＣ转录 因子家族中的ＡＴＡＦ亚族，与ＡＴＡＦ１的亲缘关系最近。 非生物逆境胁迫下的表达分析显示，ＭｓＮＡＣ１基因在高盐、干旱和低温 胁迫下表达量均呈现先上调后下调的趋势，不同处理时间的差异达到极显著水平，并且根中的表达量上调幅度高于叶片，说 明该基因可能参与调控非生物逆境胁迫的生理响应。 　 　 关键词：紫花苜蓿；ＮＡＣ转录因子；基因克隆；生物信息学分析；荧光定量ＰＣＲ；非生物逆境 Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ａｎ Ｎｏｖｅｌ ＮＡＣ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ＦａｃｔｏｒＭｓＮＡＣ１ ｆｒｏｍ Ｍｅｄｉｃａｇｏ ｓａｔｉｖａ Ｌ．ａｎｄ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｉｔｓ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｕｎｄｅｒ Ａｂｉｏｔｉｃ Ｓｔｒｅｓｓｅｓ ＳＨＥＮ Ｙｕ⁃ｈｕａ，ＸＵ Ｚｈｅｎ⁃ｊｕｎ，ＹＡＮＧ Ｘｉａｏ⁃ｐｏ，ＸＩＡＮＧＪｉ⁃ｓｈａｎ，ＷＥＮＪｉｎｇ，ＨＵＡＮＧ Ｗｅｎ⁃ｊｉｅ （Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｈｉｆｅｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｉｆｅｎｇ ＩｎｎｅｒＭｏｎｇｏｌｉａ０２４０００） Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＮＡＣ ａｒｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｎｏｖｅｌ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎ ｐｌａｎｔｓ ｗｉｔｈ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ，ｗｈｉｃｈ ｐｌａｙ ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｒｏｌｅ ｉｎ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ｓｔｒｅｓｓ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ａｎｄ ｈｏｒｍｏｎａｌ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｌａｎｔ．Ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ，ｔｈｅ ＭｓＮＡＣ１（ＪＮ０９９３８４１）ｇｅｎｅｉｎＭｅｄｉｃａｇｏｓａｔｉｖａＬ．ｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄｂｙｒａｐｉｄａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆ ｃＤＮＡｅｎｄｓ（ＲＡＣＥ）ｍｅｔｈ⁃ ｏｄ．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＭｓＮＡＣ１ｈａｄａｎｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅ（ＯＲＦ）ｏｆ９９３ｂｐ，ｅｎｃｏｄｉｎｇａｓｔａｂｌｅ，ｗａ⁃ ｔｅｒ⁃ｓｏｌｕｂｌｅ ｐｒｏｔｅｉｎｗｉｔｈ３３０ ａｍｉｎｏａｃｉｄｓ．ＴｈｅＭｓＮＡＣ１ｐｒｏｔｅｉｎｈａｄｔｈｅｂａｓｉｃｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｔｈｅＮＡＣｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ＮＡＭ ｄｏｍａｉｎ ｉｎｔｈｅ Ｎ⁃ｔｅｒｍｉｎｕｓａｎｄｈｉｇｈｌｙ ｄｉｖｅｒｇｅｎｔ Ｃ⁃ｔｅｒｍｉｎｕｓ．Ｉｔｗａｓｐｒｅｄｉｃｔｅｄｔｏｌｏ⁃ ｃａｔｅ ｉｎ ｔｈｅｎｕｃｌｅｕｓｗｉｔｈ２ ｎｕｃｌｅａｒｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，ａｎｄｃｏｎｔａｉｎｅｄ９ ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎｓｉｔｅｓａｎｄ２３ｐｈｏｓｐｈｏｒｙ